Выдержка из книги
Богданов А.А.
Методы исследования нуклеиновых кислот
Для этого следует подобрать подходящую нуклеазу. Для гидролиза РНК применяют обычные РНК-азы. РНК-аза Т2 из такадиастазы действует подобно щелочи, освобождая нуклеозид-3, 5 -дифосфат, содержащийся на левом конце молекулы. Более специфические РНК-азы - панкреатическая РНК-аза и РНК-аза TI из такадиастазы - отщепляют как концевые нуклеозиддифосфаты, так и более крупные фрагменты, содержащие фосфатные группы у 3 - и 5 -конца. Эти соединения можно отделить от остальных продуктов реакции, таюке используя различия в их зарядах; однако для этого требуется более совершенный метод, поскольку в гидролизате обычно имеются олигонуклеотиды, заряды которых меньше пли больше зарядов динуклеозиддифосфатов либо равны им. На первом этапе продукты гидролиза разделяют по величинам их суммарных отрицательных зарядов с помощью хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе или ДЭАЭ-сефадексе в 7 М мочевине. Если хроматографируют при рН 7 8, то концевое звено за счет того, что оно имеет две фосфомоноэфирные группировки, будет элюироваться вместе с фрагментами нуклеотидной цепи, содержащими на два нуклеотидных остатка больше, но несущими тот же суммарный отрицательный заряд. В этих условиях вторичная диссоциация фосфатных групп подавлена, и заряд концевого звена отличается на одну единицу от заряда других полимерных фрагментов.