Cтраница 3
Разделение смеси дегидрогеназ на № - ( 6-амнногексил - 5 - АМР-сефаро-зе с помощью градиента рН. [31] |
Десорбция папаина с агарозы со связанным глицилглицил - О-бензил - Ь - тирозил - О-аргинином является примером элюирования путем понижения ионной силы элюирующего буфера. [32]
Гели декстрана и агарозы подвержены действию микроорганизмов ( бактерий и плесени), вызывающих деградацию геля и изменение его хроматографических свойств. Кроме того, если хроматографирование ведется на инфицированном геле, выход разделенных соединений ( биополимеров) уменьшается и в элю-ате появляются примеси. Хотя чисто синтетические гели, например полиакриламид, полиметилметакрилат, полистирол, сами и не разрушаются микробами, эти микробы могут расти в той среде, в которой суспендирован гель, а также на поверхности геля. В результате этого в элюате, полученном на гелях этого типа, также появляются примеси. [33]
К уплотненному гелю агарозы, сформировавшемуся при оседании агарозы в буфере, в количестве, эквивалентном 3 г сухого веса носителя, добавляют 3 мл раствора ЛДГ в концентрации 1 мг / мл. ЛДГ предварительно обессоливают на колонке с сефадек-сом G-50, уравновешенной 0 1 М Na-фосфатным буфером, рН 7 4, содержащим 5 мМ ЭДТА. Инкубацию проводят в течение 10 мин при комнатной температуре и постоянном осторожном перемешивании. [34]
Свойства гелей агарозы ( по данным фирм-изготовителей. [35] |
Область применения геля агарозы несколько неопределенна, поскольку отсутствуют необходимые высокомолекулярные соединения с известным молекулярным весом, которые могли бы служить стандартами. Преимущество этого геля, несомненно, заключается в его способности разделять вирусы, фаги, фрагменты клеток и бактерии. [36]
Сшивки в геле агарозы обусловлены не ковалентными, а водородными связями между цепями полисахарида. Этим объясняется бблыная чувствительность агарозы к воздействию таких реагентов, которые способны разрушать водородные связи. Агароза устойчива в интервале рН 4 - 9 и в интервале температур 1 - 40 С. Относительно концентрированные растворы солей, например 1М раствор хлорида натрия, или мочевины ( до 2М) не влияют на хроматографические свойства агарозы. [37]
Рассмотренные методы активации агарозы, как уже упоминалось, приводят к получению сорбентов, на которые нуклеофильная атака со стороны лиганда должна проводиться в щелочной среде. В то же время все эти сорбенты чувствительны к действию щелочи - эфирные и иные связи активных групп с агарозой постепенно разрушаются. Новый сорбент фирмы Pierce выгодно отличается от них заметно большей стойкостью. Кроме того, он отличается низким уровнем неспецифической сорбции из-за отсутствия зарядов ( как при активации BrCN - см. ниже) или гидрофобных свойств у N-алкилкарбаматной связи, фиксирующей лиганд на матрице. [38]
В действительности цепи агарозы высоко регулярны - дальний порядок не нарушен. Однако эти сведения получены всей совокупностью методов структурного анализа, примененных к агарозе, и не могли быть извлечены только из результатов частичного гидролиза описанного типа. [39]
Интервалы т составляли для агарозы 200 икс, для волокон сои 300 мкс, для сырой, вареной и сублимированной мьиьм ы 40 мкс, для вареной мышцы 100 мкс. [40]
Активированный носитель, например агароза или полиак-риламид, вступает в реакцию с аминогруппами лиганда. При выборе лиганда следует учитывать его сродство к выделяемому белку, способ связывания, концентрацию лиганда, тип изотермы сорбции и влияние температуры. [41]
Носители на основе гелей агарозы, содержащие очень мало заряженных групп. Интервал фракционирования определяется концентрацией агарозы в гранулах. Может быть использован в растворах, содержащих высокие концентрации солей, мочевины, гуанидингидрохлорида, хотя в условиях, способствующих сильной диссоциации, предпочтительнее использовать сефарозу CL. Разрушается под действием окислителей. Плавится при нагревании; не следует использовать при температуре 40 С. [42]
Сефароза - это гель агарозы со сферическими частицами; в продажу поступает в виде суспензии в воде ( в набухшем состоянии), содержащей 0 02 % азида натрия в качестве бактериостати-ческого агента. [43]
Ножка привязана к гелю агарозы эфирной связью. Ножка привязана к гелю агарозы бромциановым методом. [44]
Для активации больших количеств агарозы и для активации мембран из агарозы или тонких слоев агарозы, покрывающих стеклянные шарики, Порат и др. [54] разработали очень простой и воспроизводимый метод активации в щелочном фосфатном растворе очень высокой буферной емкости; при этом отпадает необходимость контроля рН и интенсивного перемешивания. Найдены условия для высокой, средней и низкой степеней активации, которые выбираются, исходя из природы связываемого аффинного лиганда. Методики даны для гелей с разным содержанием ( р, %) агарозы в набухшем геле. [45]