Субтилизин

Cтраница 1

Субтилизин оказывает сильноэ литическое действие на Escherichia coli, Vibrion septique и некоторые виды Salmonella и Pasteurella, но не действует на стафилококки и стрептококки. Он не теряет активности при хранении в течение 4 месяцев при комнатной температуре, но его водные растворы быстро разрушаются при нагревании. В чистом виде он еще не выделен. [1]

Субтилизин гидро-лизует пептидную связь между 20 - м и 21 - м аминокислотными остатками рибонуклеазы. Полученный пептид, состоящий из 20 аминокислотных остатков, способен обратимо отделяться от оставшейся части молекулы фермента. Удаление пептида сопровождается утратой активности, а его воссоединение с молекулой - за счет нековалентных связей - приводит к полному восстановлению активности фермента. Далее восстановление четырех дисуль-фидных связей молекулы рибонуклеазы вызывает полное разворачивание полипептидной цепи фермента. Когда при окислении кислородом дисульфидные связи снова образуются, происходит почти полное восстановление активности фермента. [2]

Субтилизин, специфичность 126 Судан черный 251 S-Сульфопротеины 106 и ел. [3]

Субтилизин прежде всего расщепляет связи по соседству с сернном, глицином и ароматическими аминокислотами. Эластаза менее специфична и преимущественно гидролизует связи нейтральных аминокислот. Основными точками воздействия малоспецифичного папаина являются остатки аргинина, лизина и глицина, кислые аминокислоты не затрагиваются. Термолизин предпочтительно расщепляет полипептидную цепь по аминокислотным остаткам с гидрофобной боковой цепью. [4]

Пепсин, папаин и субтилизин обладают низкой специфичностью. Поэтому, за исключением пепсина, в этих ферментах, трудно обнаружить примеси других ферментов. В случае пепсина это не имеет большого значения, так как оптимум его активности наблюдается при рН 1 8 - 2 2, в то время как возможные примеси других ферментов проявляют свое действие в среде, близкой к нейтральной. Влияние примесей может быть ослаблено уменьшением времени переваривания исследуемого белка ферментом. Пепсин разрывает пептидные связи, соседние как с глутаминовой кислотой или глутамином, так и с фенилаланином или тирозином. Иногда отсутствие специфичности проявляется в том, что он гидролизует связи аланин - аланин и аланин - серии. Папаин обладает аналогичной низкой специфичностью с еще более широким спектром активности. Субтилизин также имеет широкий спектр активности, гидролизуя связи, которые расщепляют трипсин, химотрипсин и пепсин. Однако его особым преимуществом является способность гидролизовать нативные белки. Следовательно, с его помощью могут быть обнаружены дисульфидные мостики, например в инсулине и рибонуклеазе. [5]

Среди сериновых протеаз на первом месте стоит субтилизин Carlsberg. При участии Bacillus licheniformis ежегодно производится около 500 т очищенного фермента. Сериновые протеазы не гидролизуют белки до аминокислот. [6]

Тот факт, что другая сериновая протеиназа, субтилизин, белок, не обладающий структурной близостью к группе химотрипсина, содержит, тем не менее, тот же каталитический участок, явился ошеломляющим открытием. Этот факт означает, что каталитические механизмы, используемые обоими этими ферментами, также идентичны. Отсюда, безусловно, следует заключение, что две линии в эволюции ферментов пришли к одному и тому же решению проблемы гидролиза амидной связи. Если это заключение справедливо для сериновых протеиназ, оно может быть справедливо и для протеиназ, в механизмах действия которых участвуют другие аминокислотные остатки, и вообще для ферментов, катализирующих любую данную реакцию. Эти данные, таким образом, могут служить косвенным доказательством нашего предположения о том, что очень большое число-ферментов, участвующих в жизненных процессах, может использовать значительно меньшее число каталитических механизмов. [7]

Хроматограмма яда кобры ( Naja nigricollis, полученная на биполярном анионите. [8]

Полученный раствор обрабатывают 35 мкл свежеприготовленного 1 % - ного раствора субтилизина и выдерживают 3 5 ч в термостате при 25 С. Дигерирование останавливают, высушивая раствор при температуре ниже 0 С. [9]

Модель пространственной структуры рибонуклеазы А. [10]

По данным Рихардса [219], рибонуклеаза А при обработке бактериальной протеазой субтилизином расщепляется между остатками А1а - 20 и Ser-21 на так называемый S-nenmud ( 1 - 20) и S-белок с последовательностью 21 - 124, содержащей 4 дисульфидных мостика. Оба компонента после разделения показывают ничтожную биологическую активность. S-пептид и S-белок с помощью невалентных связей собираются в так называемую рибонуклеазу S, обладающую пространственной структурой, близкой к нативной конформации. [11]

Влияние случайных замен аминокислотных остатков в определенных участках на стабильность субтилизина BPN, лишенного кальцийсвязывающего домена1. [12]

Фермент, полученный при их внесении в один ген, обладал кинетическими свойствами, сходными с таковыми исходного субтилизина. Кроме того, мутантный субтилизин в отсутствие кальция был почти в 10 раз более стабилен, чем исходный и, как это ни удивительно, примерно на 50 % более стабилен, чем исходный фермент в присутствии кальция. Полученные результаты показывают, что несмотря на трудоемкость этих экспериментов с помощью генной инженерии можно изменять свойства ферментов, которые зависят от большого числа аминокислотных остатков. [13]

Еще один пример отщепления пептида от белковой молекулы дает превращение яичного альбумина в пластинчатый альбумин [442, 443] под действием субтилизина ( протеиназы В. [14]

После превращения катионных и анионных носителей в полимерные соли диазоння или ацилазиды к полимерам присоединялись трипсин, химотрипсин, субтилизин Ново, субтилизпн Карлсберга и папайи. [15]

Страницы: 1 2 3