Cтраница 3
Холестерин в некоторых отношениях является антагонистом лецитина. Так, ре-зистентность эритроцитов к гемолизинам - веществам, вызывающим растворение ( гемолиз) красных кровяных шариков, содержащимся, например, в змеином яде, резко изменяется при добавлении коллоидных растворов лецитина или холестерина. Лецитин и лизолецитин способствуют гемолизу эритроцитов; холестерин, напротив, повышает устойчивость эритроцитов к гемолизинам. [31]
Холестерин в некоторых отношениях является антагонистом лецитина. Так, ре-зистентность эритроцитов к гемолизинам - веществам, вызывающим растворение ( гемолиз) красных кровяных шариков, содержащимся, например, в змеином яде, резко изменяется при добавлении коллоидных растворов лецитина или холестерина. Лецитин и лизолецитин способствуют гемолизу эритроцитов; холестерин, напротив, повышает устойчивость эритроцитов к гемолизинам. [32]
Образующиеся при этом лизо-коламинфоефатиды обладают, подобно лизолецитинам, сильным гемолитич. [33]
Их применяют для разделения веществ самых различных классов, включая углеводороды, терпены, стероиды, спирты, фенолы, альдегиды, кетоны, перекиси, органические кислоты, амины, амиды, аминокислоты, пептиды, алкалоиды, сахара, нуклеиновые кислоты, неорганические ионы. Последовательность элюирования липидов следующая: углеводороды ( парафины - циклопарафины - нормальные моноолефины - моноолефины циклические и разветвленные - диолефины - ароматические углеводороды - полиолефины, каротины, скваланы) - сложные эфиры - холестериновые эфиры - алифатические альдегиды - триглицериды - высшие спирты - свободные жирные кислоты - хиноны - свободные стерины - диглицериды - моноглицериды - гликолипиды - липоаминркислоты-желчные кислоты - гли-церофосфатидные кислоты - производные инозита - фосфатидилэтаноламины - лизофосфатидилэтаноламины - лецитины - сфингомнелины - лизолецитины ( Н i r s с h J. [34]
Существует две точки зрения относительно судьбы поступивших в тонкую кишку экзогенных и эндогенных фосфолипидов. Согласно одной из них, и те, и другие фосфолипиды подвергаются в кишечнике атаке со стороны фосфолипазы А2, катализирующей гидролиз сложноэфирной связи в 3-положении. В результате катализируемой фосфолипазой А2 реакции глицерофосфолипиды расщепляются с образованием лизофосфолипида и жирной кислоты. Лизофосфолипид может подвергаться расщеплению при действии другого фермента панкреатического сока-лизофосфолипазы. В результате из лизолецитина освобождается последняя частица жирной кислоты и образуется глицерофосфохолин, который хорошо растворяется в водной среде и всасывается из кишечника в кровь. [35]
В растениях уже обнаружены все реакции, приведенные на фиг. Только фосфолипаза D широко распространена в растениях. По-видимому, она присутствует в основном в пластидах. Фосфолипаза А обнаружена в растениях, животных и микроорганизмах, а также в яде змей, пчел и скорпионов. Полагают, что вредное действие ядов этих животных обусловлено активностью фосфолипазы А, катализирующей образование гемолизирующего вещества лизолецитина из лецитина. [36]
Методом одномерной хроматографии в тонком слое силикагеля проводят разделение лецитина, лизолецитина, кефалина, лизокефалина, сфингомиелина, кардиолипина, нейтральных жиров, свободных жирных кислот, холестерина и аминокислот. В системе растворителей хлороформ - метанол - вода ( 75: 22: 3) вещества распределяются по всей хроматограмме. В системе растворителей хлороформ - метанол - вода ( 65: 30: 5) увеличиваются значения Rf для лецитина, сфингомиелина. Аминокислоты почти не смещаются от исходной точки. На хроматограммах в порядке убывания располагаются: нейтральные жиры, холестерин, свободные жирные кислоты ( альдегиды), кардиолипин или аналогичные компоненты, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилхолин, лизокефалин, сфингомиелин, лизолецитин, аминокислоты. Толщина слоя адсорбента 250 мк, площадь 20X20 см, активирование адсорбента в термостате при 120 в течение 1 / 2 часов с последующим выдерживанием на воздухе в течение 2 часов. Смесь липидов наносится на хроматограмму в количестве 250 мкг. [37]
Смесью хлороформ - метанол - вода ( 75: 22: 3) или ( 65: 30: 5) одномерной хроматографией проводят разделение смеси нейтральных липидов, свободных жирных кислот, холестерина, аминокислот и фос-фатидов. В первой системе растворителей значения Rf для отдельных представителей фосфатидов очень низки; во второй - они увеличиваются. Вещества располагаются в порядке убывания RT следующим образом: нейтральные липиды, холестерин, свободные жирные кислоты ( альдегиды), кардиолипиды или аналогичные компоненты, фосфатидил-этаноламин, фосфатидилхолин, лизокефалин, сфингомиелин, лизолеци-тин, аминокислоты. При обнаружении нингидрином и подогреве при 120 в течение 10 минут пятна кефалина, лизокефалина, сфингомиелина и аминокислот приобретают красный цвет. Компоненты, содержащие хо-лин, обнаруживают реактивом Драгендорфа. Лецитин, лизолецитин, сфингомиелин окрашиваются в желто-оранжевый цвет. При высушивании хроматограммы на воздухе, опрыскивании молибдатом аммония и подогреве при 105 в течение 20 минут все вещества окрашиваются в темно-коричневый цвет. [38]
В молекуле фосфолипида лецитина содержатся две длинные цепи, из которых одна является ненасыщенной; этерификация этого соединения с образованием видоизмененного глицеринового остатка приводит к тому, что образующийся продукт хорошо растекается на чистых поверхностях с образованием мономолеку-ларной пленки. Поскольку фосфолипиды имеют большое значение в жизнедеятельности клеток, изучению поведения этих пленок было уделено значительное внимание. Из всех обнаруженных эффектов, вероятно, наиболее замечательными являются эффекты, связанные с действием змеиных ядов на пленки лецитина. Хью [39] показал, что если в раствор, находящийся под монослоем, ввести очень малые количества яда, то наблюдается быстрое падение поверхностного потенциала. В особенности высокоактивными являются яды черной ехидны, мокас-синовой змеи, ленточной виперы и дабоии. Исключением является яд кобры, который не оказывает подобного действия. Конечное значение поверхностного потенциала после реакции пленки с одним из первых четырех ядов, введенных в находящийся ниже раствор, равно поверхностному потенциалу лизолецитина. Последний представляет собой молекулу лецитина, лишенную ненасыщенной цепи. [39]
В противоположность простым липидам сложные липиды - фосфатиды, цереброзиды и холестерин - являются жизненно необходимыми липидами. Даже в периоды голодовок содержание этих липидов в клеточной протоплазме не изменяется. Лецитины необходимы для усвоения жиров, они содействуют проникновению липидов через стенки клеток. Цефалины способствуют свертыванию крови. Сфингомиелины содержатся в мозгу и нервных тканях, но их роль пока неизвестна. Интересно отметить, что яд кобр, некоторых насекомых и пауков содержит фермент, называемый лецитиназой. Этот фермент гидролизует среднюю сложноэфирную связь лецитинов. Образующийся продукт называется лизолецити-ном. Лизолецитин гемолизирует красные кровяные клетки и разрушает ткани, находящиеся рядом с местом образования леци-тиназы. [40]