Cтраница 1
Фракционируемый материал пропускают через одну и ту же колонку несколько раз; это позволяет разделить даже те компоненты смеси, которые не делятся на колонке обычной длины. [1]
Фракционируемый материал может содержать компоненты, которые изменяют активность присоединенного аффинного лиганда. Эти компоненты могут быть близки выделяемым соединениям, хотя это и не обязательно. Ферменты, например протеиназы и нукле-азы, присутствующие в неочищенных экстрактах, могут расщеплять присоединенные аффинные лиганды ( белки, нуклеиновые кислоты) и тем самым уменьшать емкость сорбента для связывания специфически комплементарного соединения. Кроме такой неспецифической деградации аффинного лиганда ферменты и другие химические соединения, присутствующие в фракционируемой смеси, могут специфически модифицировать свойства присоединенного аффинного лиганда, приводя к образованию форм с сохраненной, но измененной активностью. [2]
Фракционируемый материал растворяют с таким расчетом, чтобы 15 мг содержалось примерно в 30 - 40 мл растворителя, рН раствора подводят до 5 - 6 и раствор медленно наносят на колонку. Скорость элюирования должна быть примерно вдвое меньше скорости нанесения фракционируемого материала. Вытекающий с колонки элюат собирают фракциями в пробирки по 1 мл. [3]
Если фракционируемый материал содержит относительно много тирозиновых и фенилаланиновых остатков, то довольно полную информацию о ходе хроматографии можно получить, определяя экстинкцию элюата при 280 нм ( Е28о) и строя соответствующий график. [4]
Условия связывания фракционируемого материала и подбор градиента для элюирования не отличаются от описанных выше, однако все буферные растворы должны содержать 8 М мочевину. [5]
Около 100 мг фракционируемого материала растворяют в 5 мл 0 2 М муравьиной кислоты и наносят на колонку. [6]
Выбор буферного раствора определяется исключительно природой фракционируемого материала. Если хлориды не вступают с последним в реакцию, то рекомендуется проводить хроматографиюна ДЭАЭ-целлюлозе в С1 - форме. [7]
Подготовка ДЭАЭ-целлюлозы для хроматографии в С1 - форме производится так же, как указано выше, но уравновешивание колонки, растворение фракционируемого материала и элюирование осуществляют буферными растворами, содержащими 8 М мочевину. В качестве стартового буферного раствора в данном случае используют буферный раствор трис - HCl рН 8, содержащий 0 05 М С1 - и 8 М мочевины. Чтобы предотвратить агрегацию и ассоциацию молекул фракционируемого материала в присутствии мочевины, к буферному раствору добавляют 0 1 % додецилсульфата натрия. [8]
В-третьих, эти аппараты необходимо конструировать с учетом того, чтобы во всех зонах разделения обеспечивалось максимально возможное постоянство силового воздействия потока на частицы фракционируемого материала. Рассмотрим результаты экспериментальной проверки выдвинутых здесь положений. [9]
Это так называемый коэффициент эффективности, применяемый Брэггом [33] и Подбильняком [29], а также и в предыдущих сообщениях лаборатории [ АНИИП 6 - 106 ]; он также может быть представлен как число эквивалентных теоретических тарелок, через которое фракционируемый материал проходит в единицу времени. Для роторных колонн с концентрическими трубками коэффициент эффективности меняется относительно мало с изменением производительности при данной скорости вращения, но заметно увеличивается со скоростью вращения. А-1000, А-2000, А-3000 и А-4000, дают те же результаты с коэффициентом эффективности как функции производительности для четырех различных скоростей вращения. При 4000 об / мин величина коэффициента эффективности составляет около 10 000 час - 1 и почти не меняется с производительностью. [10]
Открыв выходное отверстие колонки, выпускают избыток буферного раствора, так чтобы его уровень был всего лишь на 1 мм выше уровня геля сефадекса, Затем, касаясь загнутым концом пипетки стенки колонки, круговыми движениями руки наслаивают на сефадекс раствор фракционируемого материала. После этого кран выходного отверстия колонки вновь открывают и дают возможность нанесенному препарату медленно войти в гель. Остаток препарата смывают тремя порциями 0 01 М NH4OH по 1 мл. Верхнюю часть колонки заполняют 0 01 М NH4OH и соединяют колонку со склянкой Мариотта или насосом. [11]
Фракционируемый материал следует наносить на колонку в минимальном объеме. [12]
Осторожно удаляют из верхней части колонки буферный раствор над целлюлозой так, чтобы над ионообменником остался слой жидкости высотой не более 2 - 3 мм. Раствор фракционируемого материала осторожно наслаивают на ДЭАЭ-целлюлозу круговыми движениями руки, прикасаясь загнутым кончиком пипетки к внутренней поверхности колонки. При наслаивании важно не взбалтывать частички ДЭАЭ-целлюлозы. Нанесенный раствор входит вио-нообменник, и затем остатки наносимого материала трижды смывают со стенок верхней части колонки 0 5 - 1 0 мл 0 05 М буферного раствора. [13]
Фракционируемый материал растворяют с таким расчетом, чтобы 15 мг содержалось примерно в 30 - 40 мл растворителя, рН раствора подводят до 5 - 6 и раствор медленно наносят на колонку. Скорость элюирования должна быть примерно вдвое меньше скорости нанесения фракционируемого материала. Вытекающий с колонки элюат собирают фракциями в пробирки по 1 мл. [14]
Новый седиментационный метод, основанный на центрифугировании в градиенте плотности, в настоящее время особенно широко распространен. Он обладает следующими двумя преимуществами: во-первых, для его осуществления требуется не аналитическая, а обычная препаративная ультрацентрифуга; во-вторых, фракционируемый материал довольно просто разделяется на индивидуальные компоненты. При этом используется так называемый бакет-ротор ( крутящееся ведерко), а процесс разделения на компоненты происходит в пластмассовых центрифужных пробирках. [15]