Метод - изотопное разведение
Cтраница 2
В тех случаях, когда определяется радиоактивность вещества в смеси без добавления устойчивого изотопного носителя, может быть использован третий вариант метода изотопного разведения. [16]
Если исследуемая РНК имеет небольшой молекулярный вес и ( или) в распоряжении имеется достаточно препарата, чтобы получить концевой нуклеозид в количестве, соответствующем хотя бы одной оптической единице ( 0 1 мкМ), то нуклеозид может быть выделен и идентифицирован прямыми методами, которые описаны ниже, и в этом случае нет необходимости прибегать к радиоактивной метке. С другой стороны, когда препарата слишком мало и ( или) длина цепи РНК велика, то следует, если это возможно, применить метод изотопного разведения. РНК гидролизуют и количество концевого нуклеозида определяют следующим образом: добавляют к гидролизату известные количества каждого из четырех нуклеозидов ( немеченых), выделяют затем эти нуклеозиды в чистом виде и измеряют оптическую плотность и радиоактивность каждого из них. [17]
Точное определение количества ионов иода, брома и хлора, когда они присутствуют вместе или попарно, является трудной аналитической задачей. Причиной, затрудняющей точное определение каждого из компонентов методом осаждения, является незначительная разница растворимости их серебряных солей в воде ( АвС1105 - 10 - 5; PAgBr6 1 - 10 - 7 и pAgJio - s моль. Благодаря этому процесс осаждения более растворимого соединения начинается до того, как полностью закончится осаждение менее растворимого галогенида серебра. Поэтому для определения ионов галоидов в их смеси целесообразно применять метод изотопного разведения. Рекомендуемый прием определения основан на том, что бромистое серебро значительно растворимо в аммиаке, а йодистое серебро малорастворимо. При неполном осаждении йодистого серебра из раствора, содержащего ион брома, последний полностью остается в растворе. При количественном осаждении йодистого серебра избытком азотнокислого серебра образующийся осадок йодистого серебра загрязняется бромистым серебром. [18]
Это подтверждается также и влиянием заместителей: при снижении основности амина рН - оптимум смещается в сторону большей кислотности, и наоборот. То, что главный путь отщепления амина приводит к открытой форме ( реакция Ь), доказывается тем, что экспериментально найденные после гидролиза концентрации а. Сахаров рказались весьма близкими тем, которые были высчитаны на основании константы скорости циклизации открытой формы. Саймон и Пальм [24] подтвердили рассмотренный механизм, изучая освобождение амина методом изотопного разведения. [19]
 |
Подагра. Подагрические узлы в области суставов пальцев рук. [20] |
При некоторых других заболеваниях, например нефритах ( воспалении почек), лейкемиях ( белокровии), концентрация мочевой кислоты в крови значительно больше, чем при подагре, но при этом признаков подагры не наблюдается. Очевидно, одного увеличения содержания мочевой кислоты в крови еще недостаточно для возникновения подагры. По-видимому, в некоторых тканях должны создаваться условия, благоприятствующие отложению уратов. Об этом свидетельствует и тот факт, что отложения уратов при подагре наблюдаются только в определенных местах, а не во всех тканях и органах. Недавно с помощью метода меченых атомов ( метод изотопного разведения) было достоверно показано, что при подагре действительно наблюдается заметное повышение концентрации мочевой кислоты: в тканях. Так или иначе, механизм возникновения подагры остается неясным, поэтому и меры борьбы с ней только облегчают, но не устраняют заболевание. Рекомендуется беспуриновая диета, весьма ограниченная в жирах, но содержащая много углеводов, и нормальное, но не чрезмерное количество белков. Кроме того, рекомендуется применение щелочных питьевых вод и солей лития, дающих растворимые соли мочевой кислоты, легко удаляемые из организма. [21]
При некоторых других заболеваниях, например нефритах ( воспалении почек), лейкемиях ( белокровии), концентрация мочевой кислоты в крови значительно больше, чем при подагре, но при этом признаков подагры не наблюдается. Очевидно, одного увеличения содержания мочевой кислоты в крови еще недостаточно для возникновения подагры. По-видимому, в некоторых тканях должны создаться условия, благоприятствующие отложению уратов. Об этом свидетельствует и тот факт, что отложения уратов при подагре наблюдаются только в определенных местах, а не во всех тканях и органах. Недавно с помощью метода меченых атомов ( метод изотопного разведения) было достоверно показано, что при подагре действительно наблюдается заметное повышение концентрации мочевой кислоты в тканях. Так или иначе, механизм возникновения подагры остается неясным, поэтому и меры борьбы с ней только облегчают, но не устраняют заболевание. Рекомендуется беспуриновая диета, весьма ограниченная в жирах, но содержащая много углеводов, и нормальное, но не чрезмерное количество белков. [22]
Прямое определение железа осаждением его аммиаком затруднено вследствие присутствия хрома и алюминия, осаждаемых этим реактивом. Объемному определению железа хром также препятствует. Экстракция железа из солянокислых растворов не приводит сразу к количественному извлечению. Поэтому приходится проводить ряд экстракций, не говоря уже о затруднениях, связанных с разделением водной и органической фракций. Определение железа в растворе, содержащем хром и алюминий, может быть выполнено методом изотопного разведения. [23]
Прямое определение железа осаждением его аммиаком редко бывает возможным вследствие присутствия других осаждаемых этим реактивом элементов. Вместе с тем хром, например, препятствует объемному определению железа. Отделение железа экстракцией из солянокислых растворов никогда не приводит сразу к количественному извлечению железа. Поэтому приходится проводить ряд экстракций, не говоря уже о затруднениях, связанных с точным разделением водной и органической фракций. Определение железа в растворе, содержащем хром и алюминий, может быть выполнено методом изотопного разведения. [24]
Любой одинаковый по строению компонент смеси, будучи немеченым, станет разводить ( снижать концентрацию) добавленную меченую аминокислоту. Чтобы определить степень разведения, требуется выделить в чистом виде только часть добавленного носителя. Поэтому допустимы потери в процессе выделения. Кроме того, существует также возможность определения рацемизации аминокислот, так как при добавлении ( / / - смеси меченого носителя удается найти количество обеих 1 - й ( / - форм аминокислоты. В аминокислотах, получающихся из природного белка, находят почти исключительно / - форму, и поэтому в общем требуется поправочный коэфициент, равный двум, если берется носитель, представляющий рацемическую смесь двух изомерных форм. Ошибка метода может быть ниже 1 %, что свидетельствует об исключительной точности этих определений. Метод изотопного разведения отличается от метода определения межуточных продуктов обмена веществ тем, что в анализ берут меченый носитель. Метод применим ко всем типам смесей и разработан как полезный аналитический прием Риттенбергом -, Фостером и их сотрудниками [16], работавшими со стабильными изотопами водорода, углерода и азота. [25]
Страницы: 1 2