Cтраница 2
Анализы рибонуклеотидов и дезоксирибонуклеотидов можно проводить на сильноосновных анионообменных смолах. Поскольку эти нукл еотиды имеют родственную структуру, но значительно меняются при ионизации, то, чтобы повысить разрешение колонки, рекомендуется использовать метод градиентного элюирования. [16]
Благодаря многообразию элюентов разделение смесей с самой разной полярностью можно проводить как на полярных, так и на неполярных непо -; движных фазах. На рис. VI.16 приведена хроматограмма смеси, содержащей 21 компонент самой различной полярности, начиная с неполярного углеводорода сквалана и кончая растворимой в воде полярной глюкозой; хроматограмма получена с помощью метода ступенчатого градиентного элюирования. [17]
Наиболее широко применяется метод элюентной хроматографии. Элю-ирование выполняют разбавленными водными или водно-органическими растворами минеральных кислот, главным образом соляной или азотной. Метод градиентного элюирования с повышающейся концентрацией элюен-та имеет ряд преимуществ. [18]
Чтобы проверить, восстановлены ли в системе исходные условия, повторно определяют величину k для пробы. Для регенерирования разделительной колонки и восстановления исходных условий требуется по меньшей мере 10 - 30 колоночных объемов элюента. Таким образом, регенерация колонки занимает больше времени, чем само разделение методом градиентного элюирования. Поэтому часто имеет смысл не приводить колонку опять к исходным условиям ( равновесие с неполярным элюентом), а стандартизовать также время регенерирования, поскольку это все равно необходимо делать из-за примесей в элюенте. [19]
Данные, получаемые обоими методами, весьма сходны между собой, за исключением того факта ( обнаруженного при последующих сравнительных исследованиях на полистироле), что метод Бейкера - Вильямса позволяет получить более высокомолекулярную фракцию в конце фракционирования. Отмеченное сходство результатов фракционирования методами хроматографии и градиентного элюирования весьма удивительно, если исходить из положения, что градиентное элюирование представляет собой одностадийный процесс, а хроматографическое фракционирование - многостадийный процесс, так как в этом случае при перемещении через колонку фракция подвергается многократным последовательным осаждениям и растворениям под влиянием градиента температуры и градиента концентрации растворителя. Очевидно, избирательное осаждение, обычно применяемое при фракционировании методом градиентного элюирования, но, как правило, не используемое при хроматографическом фракционировании, играет значительную роль и может оказаться одной из причин близости результатов, полученных обоими методами. [20]
Разбавленные растворы хинолина в додекане подвергались каталитическому гидрированию, и необходимо было определить, какие получились продукты. На рис. 6.5 показаны основные интересующие нас продукты, хотя они не были известны в начале работы. Вначале был проведен качественный анализ основных продуктов образца. Начальное, поисковое разделение, цель которого-определить композиционный состав образца, целесообразно проводить методом градиентного элюирования. [21]
Разбавленные растворы хинолина в додекане подвергались каталитическому гидрированию, и необходимо было определить, какие получились продукты. На рис. 6.5 показаны основные интересующие нас продукты, хотя они не были известны в начале работы. Вначале был проведен качественный анализ основных продуктов образца. Начальное, поисковое разделение, цель которого - определить композиционный состав образца, целесообразно проводить методом градиентного элюирования. [22]
Необходимость использования небольших проб в высокоэффективной жидкостной хроматографии может являться и недостатком. При сборе фракций количество каждого выделенного компонента очень мало. Однако, в общем случае, этого количества достаточно для проведения идентификации спектральными методами. В высокоэффективной жидкостной хроматографии колонки используются многократно. Компоненты смеси, попавшие на колонку, элюируются из нее до начала следующего анализа. В качестве подвижных фаз выбирают такие жидкости, которые не изменяют характеристик колонок. При использовании метода градиентного элюирования регенерирование колонок производят путем промывания их не-колькими объемами подвижной жидкой фазы первона-чального состава. [23]