Cтраница 4
В последние годы большая потребность в новых методах разделения способствовала появлению целого потока сообщений о поведении белков, пептидов и аминокислот при электрофорезе в стабилизирующих средах. При разделениях методом подвижной границы получают лишь частичное разделение компонентов; при этом приходится применять меры против конвекции, чтобы стабилизировать границы и облегчить последующее разделение обнаруженных компонентов. В течение ряда лет внимание исследователей было приковано главным образом к разделению белков методом электрофореза на бумаге. Этот метод может дать ценные сведения там, где необходимо провести быстрый предварительный анализ смеси белков. Для препаративных целей и для тонких аналитических разделений данный метод применяется очень редко; он почти полностью вытеснен методами электрофореза, в которых используются другие инертные материалы. [46]
Можно представить себе, что обычный регуляторный ген, активированный соответствующим сигналом дифференциации, инициирует биосинтез всех компонентов клетки, характерных для соответствующей стадии дифференциации. Например, стадии, необходимые для морфологической дифференциации, регулируются независимо от стадий, необходимых для синтеза медиатора. Эта область исследования бурно развивается и мы должны удовлетвориться кратким описанием, чтобы не утонуть в потоке предварительных наблюдений. Один из методов исследования заключается в действии на подходящую клеточную линию биологических ( например, фактор роста нерва, сокращенно NGF; рис. 11.3) или искусственных ( например, ди-бутирил - сАМР, диметилсульфоксид) стимулов до тех пор, пока нейриты разрастутся; параллельно устанавливаются, например, изменения состава ферментов или мембранных белков. Интересно отметить, что в ходе дифференциации in vitro наблюдались только количественные изменения в составе белка таких клеточных линий: хотя используемый для анализа метод двумерного электрофореза очень чувствителен, ни один новый белок не был идентифицирован и ни один из ранее присутствовавших белков не исчез. [47]
Методы хроматографирования на бумаге отдельных пуринов, пирими-динов, нуклеозидов и нуклеотидол явились новой предпосылкой для изучения нуклеиновых кислот. Вплоть до настоящего времени выделять и идентифицировать пуриноиые и пиримидиновые основания, нуклеозиды и нуклеотиды в смесях гпдролизатов нуклеиновых кислот можно было только химическими методами; для этого требовалось значительное количество вещества, часто 100 г и более. Химические методы требовали большой затраты времени, были ограниченными в применении и далеко не количественными. Лишь хроматографические методы позволяют анализировать нуклеиновые кислоты бактерий, плесеней и опухолей, поскольку в этих случаях доступные количества нуклеиновых кислот весьма невелики. С хроматографией на бумаге успешно конкурирует лишь хроматография на ионообменниках, которая применяется главным образом в микропрепаративных целях. Последний метод часто сочетают с анализом получаемых фракций методом хроматографии на бумаге. Кроме того, хроматография на бумаге в последнее время служит дополнением к методу электрофореза на бумаге. [48]