Cтраница 2
Аналогичный подход - полимеризация три - или тетрануклео-тидного блока - был также использован для получения олигону-клеотидов с повторяющейся тринуклеотидной 37 - 371 и тетрануклео-тидной 372 последовательностью. Для синтеза соединений такого типа часто применяется и другой подход, основанный на ступенчатом наращивании цепи олигонуклеотида. [16]
Современные исследователи критически относятся к механизму синтеза углеводородов, предложенному С. Крэксфордом, считая, что последние образуются не путем гидрокрекинга гигантских молекул, а ступенчатым наращиванием углеродной цепи. [17]
Синтез М - конце-вого пентапептида ( Н 1 - 5) [2386] был осуществлен, исходя из дипептида Form-L-Leu-D-Dab ( Cbo) - OMe ( A 1 - 2) путем ступенчатого присоединения аминокислотных остатков с помощью азидного метода. В противоположность обычно применяемому в пептидном синтезе способу присоединения аминокислот с С-конца в данном случае ступенчатое наращивание пептидной цепи осуществляли, начиная с N-концевого остатка. Все промежуточные пептиды, полученные с помощью карбодиимидного метода, в отношении чистоты и выхода уступали соответствующим пептидам, синтезированным азидным методом. Пептиды со свободными карбоксильными группами были получены как щелочным гидролизом соответствующих эфиров, так и непосредственно с помощью ангидридного метода путем конденсации с солями соответствующих низших свободных пептидов. [18]
Вторая стадия синтеза заключается в избирательном отщеплении защитной карбобензоксигруппы действием бромистого водорода в ледяной уксусной кислоте. Из схемы видно, что последующие стадии синтеза по существу повторяют первые две, чем достигается монотонное ступенчатое наращивание пептидной цепи. Лишь для присоединения карбобензоксисерина использован не / г-нитрофениловый эфир, а азид ( см. стр. Для присоединения N-концевого остатка аргинина применен трикарбобензоксиаргинин. [19]
Вторая стадия синтеза заключается в избирательном отщеплении защитной карбобензоксигруппы действием бромистого водорода в ледяной уксусной кислоте. Из схемы видно, что последующие стадии синтеза по существу повторяют первые две, чем достигается монотонное ступенчатое наращивание Пептидной цепи. Лишь для присоединения карбобензоксисерина использован не n - нитрофениловый эфир, а азид ( см. стр. Для присоединения N-концевого остатка аргинина применен трикарбобензоксиаргинин. [20]
Получение самих активированных сложноэфирных производных связано с лишней стадией синтеза, однако есть возможность получать эти производные в больших количествах и сохранять их до-момента использования. Тем не менее следует заметить, что стадии образования сложного эфира и аминолиза подвержены рацемизации в связи с образованием оксазолона, и поэтому метод активированных сложных эфиров наиболее часто используется в ступенчатом наращивании оптически устойчивых производных аминокислот, содержащих устойчивые уретановые ( например, бензил-оксикарбонильную и грег-бутоксикарбонильную) защитные группы. [21]
Для получения по возможности количественного превращения активированный карбоксикомпонент вводится в избытке. Этот вариант стратегии был впервые применен Бо-дански в 1959 г. и теперь с успехом используется как при традиционных синтезах в растворе, так и в синтезах иа носителях. Традиционный метод ступенчатого наращивания цепи с С-конца с тщательной очисткой и характеристикой промежуточных продуктов по-прежнему преобладает. Для конденсации используются преимущественно активированные эфиры. Очистка и характеристика промежуточных продуктов происходят обычно на стадии полностью защищенных соединений. После отщепления а-аминозащитной группы полученное производное применяется прямо для следующей реакции конденсации. Получение биологически активных пептидов или крупных фрагментов этим путем является довольно трудной задачей, требующей больших экспериментальных затрат. Лимитирующий фактор этой стратегии - быстро уменьшающаяся растворимость растущей пептидной цепи в обычно применяемых органических растворителях. Бодаиски на примере полного синтеза амида гептакозапептида секретина ( разд. [22]
Под стратегией понимают последовательность соединения аминокислотных составляющих в пептид. Теперь под стратегией понимается только тип соединения аминокислот, причем различают ступенчатое наращивание цепей и фраг-ментную конденсацию. Особенности этих путей синтеза обсуждаются ниже. [23]
Совершенно иной задачей является синтез полипептндов заданной структуры из разнообразных аминокислот, в пределе - синтез белков. Этот синтез должен проводиться ступенчато путем нанизывания одного за другим аминокислотных звеньев по заданной программе. В настоящее время органическая химия развита в такой мере, что подобное ступенчатое наращивание полипептидной цепи вполне осуществимо. Для этого необходимо защитить все реакционо-способные группы у аминокислоты, кроме, например, карбоксильной группы, и все реакционоспособные группы пептида, кроме аминогруппы. [24]
Кроме того, на практике найдено, что выходы в реакции конденсации значительно выше в случае активированных ациламинокислот, чем в случае активированных пептидов. Первые несомненно значительно доступнее, чем большие пептиды, и выходы в пептидном синтезе можно значительно улучшить, если ацилирующий агент брать в умеренном избытке. Это особенно справедливо для твердофазного синтеза, где избыток растворимого реагента легко удаляется от нерастворимого полимера. Несмотря на то, что подход, состоящий в ступенчатом наращивании, делает максимальным число последовательно проводимых конденсаций, его относительная эффективность часто делает этот метод оптимальным для синтеза пептидов средней величины. Он был успешно использован для синтеза в растворе полной последовательности цепи гормона секретина [111], содержащего 27 остатков аминокислот. [25]
Защищенный тетрапептид ( D 5 - 8) синтезирован взаимодействием Cbo-Ileu-His ( Bzl) - OH ( В 5 - 6) ( полученного, в свою очередь, щелочным омылением соответствующего бензи - левого эфира) с H-Pro-Phe-OMe НС1 карбодиимидным методом. Селективное декарбобензоксилирование тетрапептида ( С 5 - 8) осуществляли обработкой насыщенным раствором бромистого водорода в ледяной уксусной кислоте в течение 30 мин. Эфир карбобензокситетрапептида ( С 5 - 8) получен также путем ступенчатого наращивания пептидной цепи карбодиимидным методом и методом смешанных ангидридов. Конденсация фрагментов ( D 2 - 4) и ( D 5 - 8), проводившаяся в присутствии N, N - ди-циклогексилкарбодиимида, привела к защищенному гептапеп-тиду ( Е 2 - 8), который подвергали декарбобензоксилированию обработкой бромистым водородом в ледяной уксусной кислоте. [26]