Cтраница 1
Нерастворившийся белок отбрасывают центрифугированием при 5GOg в течение 10 мин. Супернатант, содержащий фосфофруктокиназу, разливают на несколько порций и хранят при - 70 С. [1]
Na - p - глицерофосфатном буфере, рН 7 0, содержащем 50 мМ 2-меркаптоэтанол; растворяют осадок добавлением 0 1 объема 5 М NaCl. Нерастворившийся белок удаляют центрифугированием. [2]
Это значит, что оба компонента в такой системе могут присутствовать в любых соотношениях, совместимых с их взаимной растворимостью. Однако если рассматривать насыщенный раствор того же белка, в котором суспензировано некоторое количество нерастворившегося белка, то мы будем иметь уже двухфазную систему с числом степеней свободы, равным нулю. Это значит, что при любом соотношении фаз их состав должен быть неизменным. [3]
Для более полной кристаллизации раствор фермента оставляют на ночь при 0 - 4 С. На следующий день суспензию центрифугируют ( ISOOOg, 15 - 20 мин лри 0 - 4 С), осадок растворяют в 30 мМ Na - p - глицерофосфате, рН 6 8, содержащем 30 мМ L-цистеин ( или 2-меркаптоэтанол) при 30 С. Нерастворившийся белок отделяют центрифугированием и отбрасывают. К супернатанту вновь добавляют АМФ и Mg ( CH3COOH) 2 в той же концентрации. [4]