Cтраница 1
Ретггеноструктурный анализ олиго-мерных белков представляет намного более сложную задачу по сравнению с аналогичными исследованиями одноцепо-чечных белков. Тем не менее мы уже располагаем достаточно большой информацией, позволяющей приблизиться к пониманию чрезвычайно важных закономерностей, определяющих биологическую активность олигомерных белков. [1]
Иммобилизация может быть использована также для предотвращения спонтанной ассоциации между субъединицами олиго-мерных белков. Она позволяет, например, определить, является ли субъединичная форма фермента каталитически активной. Если да, то сравнение свойств фермента со свойствами соответствующего иммобилизованного олигомера может дать ценную информацию о влиянии взаимодействий субъединиц на ферментативные функции. Примером может служить работа Чена и др. [6], иммобилизовавших мышечную альдолазу в условиях, когда присоединяется только одна из четырех субъединиц. С помощью гуанидинхло-рида молекулы фермента, связанного с нерастворимым носителем, были диссоциированы и элюированы с колонки таким образом, что на колонке остались только ковалентно связанные развернутые субъединицы. [2]
Это необходимо для того, чтобы знать, какой белок подвергается анализу - протомер или олигомер. Олиго-мерные белки предварительно обрабатывают надмуравьиной кислотой для разделения на отдельные полипептидные цепи. TV-Концевую аминокислоту определяют при помощи динитрофторбензола, который реагирует с а-ами-ногруппой белка, образуя окрашенное в желтый цвет производное. Что касается С-концевых аминокислот, то их определение связано с применением ферментативного метода. В качестве фермента чаще всего используют карбокси-пептидазу А, которая последовательно отщепляет от карбоксильного конца отдельные аминокислоты. Суть метода заключается в количественном определении накопления свободных аминокислот во времени. [3]