Гибридный белок
Cтраница 1
Гибридный белок, химерный белок ( Fusion protein) Продукт клонированных совместно двух или более кодирующих последовательностей из разных генов. Представляет собой одну полипептидную цепь. [1]
На долю гибридного белка приходилось примерно 12 % суммарного внутриклеточного белка. Теперь нужно выяснить, будет ли этот белок синтезироваться в достаточном количестве присутствующими в рубце бактериями. [2]
Появление самонесовместимости у тетраплоидов Льюис относит за чет диплоидизации пыльцевого зерна и образования гибридного белка между продуктами разных аллелей в нем. [3]
Белки CrylC и CrylE токсичны для чешуекрылых, но обладают разной видоспецифично-стью: CrylC действует на S. В одной из лабораторий был создан гибридный белок CrylC-CrylE, токсичность которого проверялась на разных насекомых. Гибридный токсин G27, содержащий домен III белка CrylC, был токсичен для личинок S. [5]
В том случае, когда гибридные молекулы обладают сильной ингибирующей активностью, суммарная активность достигает величины, достаточной для осуществления реакции самонесовместимости. Если считать, что в любом случае действия одних гомо-мультимеров недостаточно для проявления самонесовместимости и она осуществляется за счет активности гибридного белка, то можно строить карту комплементации в локусе S, считая, что ингибирующая активность появляется при сочетании некомплемонтирующих аллелей. [6]
Этот подход был использован при клонировании гена соматостатина-пт-тидного гормона ( 14 аминокислотных остатков) из гипоталамуса, регулирующего секрецию инсулина, глюкагона и гормона роста. Ген соматостатина был в этом случае синтезирован химически и присоединен к концу гена ( 3-галактози-дазы. В результате такие клетки синтезировали большие количества гибридного белка, состоящего из ковалентно соединенных друг с другом Р - галактозидазы и соматостатина. Гибрид р-галактозидазы и соматостатина расщепляли по пептидной связи, соединяющей два белка, что приводило к освобождению обладающего биологической активностью соматостатина. [7]
Показано, что смесь очищенного токсина В. Чтобы проверить, будет ли эта система функционировать в трансгенных растениях, был сконструирован фрагмент ДНК, кодирующий гибридный белок ингибитор протеиназ / укороченный токсин. Трансгенные растения табака, которые синтезировали небольшие количества такого ре-комбинантного белка, были в значительной мере защищены от насекомых-вредителей. [9]
Как мы уже говорили, другой способ получения токсина широкого спектра действия состоит в слиянии кодирующих участков генов двух разных токсинов. Эта возможность была проверена в лаборатории. Было создано несколько гибридных токсинов, действующих только на чешуекрылых; некоторые из этих токсинов были более эффективны, чем продукты каждого из исходных генов, а в одном случае гибридный белок обладал абсолютно новой биологической активностью. [11]
Молекула целлюлазы обычно состоит из трех доменов: каталитического, шарнирного, часто обогащенного остатками пролина, серина и треонина, и связывающего целлюлозу. Каталитический и связывающий домены функционируют независимо друг от друга. Такое разделение функций можно использовать, включив нуклеотидную последовательность связывающего целлюлозу домена в состав химерного гена, другая часть которого кодирует представляющий коммерческий интерес белок. Чтобы очистить полученный белок, его экстракт пропускают через колонку, набитую целлюлозой. С целлюлозой связывается только гибридный белок; его элюи-руют и удаляют целлюлозный домен протео-лизом. Эта система сходна с иммуноаффинной хроматографией, но обходится дешевле. [12]
 |
Карта комплементации для 5 % - ного уровня отсечения между девятью изученными S-аллелями. [13] |
Если принять, что с разными аллелями связана различная продуктивность, т.е. образуется разное число полипептидов в единицу времени ( это утверждение несколько модифицирует гипотезу Сэмпсона [23]), то у гегерозигот концентрация одного гомок1ультнмера будет еще более низкой и изменятся относительные концентрации гибридных белков. Если имеются какие-то пороговые концентрации, при которых белок вьшолняет свою функцию, то для разных аллелей время, необходимое для достижения пороговой концентрации, неодинаково. У тетраплоидов концентрация гомомультимерного белка может оказаться ниже порогового уровня, и у этих белков ингибирующая функция будет отсутствовать. Хорошим подтверждением этому является случай, когда при наличии одной и той же пары аллелей может проявляться как конкурентное взаимоотношение, так и отношение доминирования. Подводя итог всему вышеизложенному, можно предложить следующий механизм совместимости у тетраплоидов. В результате образования гибридного белка в диплоидном пыльцевом зерне концентрация гомомультимерных белков, а следовательно и их активность уменьшаются. Если гибридные молекулы, соответствующие данному генотипу, не имеют ингибирующей активности или она очень мала, а активность гомомультимеров несколько ниже пороговой, то тетраплоид будет самосовместим. [14]
Страницы: 1