Амфолиты-носитель

Cтраница 1

Амфолиты-носители, синтезированные Вестербергом [2, 14], представляют собой гетерогенную смесь различных полиамино-поликарбоновых кислот довольно низкого молекулярного веса. [1]

Схема колонки конструкции Вестерберга и. [2]

Рабочей частью колонки, в которой помещаются амфолиты-носители и создается градиент плотности, является камера, имеющая в поперечном разрезе вид кольца. Нижний электродный раствор обеспечивает контакт с нижним электродом, расположенным в - центральной трубке; таким путем достигается отвод газов из электродного пространства без нарушения градиента плотности. [3]

Полярность электродов следует устанавливать таким образом, чтобы амфолиты-носители с более высокой электропроводностью попадали в нижнюю часть колонки, где электропроводность понижена из-за высокой концентрации сахарозы. Амфо-литы с изоточками в области рН 6 - 7 обладают сравнительно низкой электропроводностью. Поэтому при работе в области рН ниже 7 вверху помещают катод, а при работе в основной среде вверху находится анод. При фракционировании сырых экстрактов удобно устанавливать полярность таким образом, чтобы примеси накапливались внизу колонки, в особенности если они склонны выпадать в осадок. [4]

В случае необходимости образец диализуют против воды, содержащей амфолиты-носители. [5]

Контрольное электрофокусирование в градиенте плотности на колонке объемом 110 мл в отсутствие образца. [6]

Определение белка по Лоури в данном случае неприменимо [41], поскольку амфолиты-носители дают сильную реакцию. Удовлетворительные результаты удается получить после диализа или осаждения белка трихлоруксусной кислотой. [7]

Затем проводят разделение исследуемой пробы, увеличив длительность процесса на 25 %, чтобы обеспечить фокусировку тех соединений, которые движутся медленнее. Даже если амфолиты-носители добавлены после полимеризации, все же рекомендуется не проводить эксперимент слишком долго. [8]

Для многих белков этого вполне достаточно, так как вскоре зоны проявляются в виде белых полос. Однако если необходимо окрасить белок, вначале следует удалить амфолиты-носители, поскольку они дают интенсивную окраску с большинством красителей для белка. [9]

В таком случае в среду добавляют избыток соответствующей соли. Часто используют иммунологическое определение, в этом случае анализу не мешают ни амфолиты-носители, ни сахароза. [10]

Наиболее распространенным методом является определение оптической плотности при 280 нм. Этот метод обладает достаточной чувствительностью, позволяет вести анализ в потоке и не сопровождается потерей вещества. Однако сами амфолиты-носители обладают сильным поглощением при 280 нм, и колебания в оптических свойствах отдельных соединений могут быть ошибочно приняты за зоны белка. Отклонение от нулевой линии невелико как при биуретовой реакции так и при записи поглощения при 280 нм. Фон при 254 нм достаточно велик. Поэтому обычные проточные денситометры, где анализ ведется при 254 нм ( линия ртути), непригодны в случае электрофокусирования. [11]

Страницы: 1