Cтраница 2
Многие из таких кислот пригодны для выделения и обнаружения аминов. Фосфорновольфрамовая кислота28 применяется главным образом для обнаружения аминокислот. Кремневольфрамовая кислота29 образует труднорастворимые соли со многими алкалоидами. Кислота Рейнеке30 H [ ( NH3bCr ( NCS) 4 ] в особенности пригодна для обнаружения вторичных и третичных аминов. [16]
Для количественного определения аминокислот и пептидов по приведенным выше реакциям требуется колориметр или фотометр, с помощью которых обнаруживают изменения в свето-поглощении, связанные с протеканием реакций. Поскольку нин-гидрин наиболее широко используется для обнаружения аминокислот и белков, он послужит основой для дальнейшего обсуждения колориметра. [17]
Такой универсальный детектор, каким хотелось бы располагать исследователям, в настоящее время еще не разработан, и метод ВЭЖХ не располагает прибором, который по своим возможностям был бы эквивалентен применяемым в газовой хроматографии детекторам по теплопроводности и пламенно-ионизационным детекторам. В этом разделе будут описаны детекторы, наиболее широко используемые для обнаружения аминокислот и пептидов. [18]
Метод анализа аминокислот с помощью ионообменной хроматографии базируется на работах Штейна и Мура [3-5], которые систематически изучали проблемы, связанные с разделением и количественным определением наиболее распространенных аминокислот. В дальнейшем эта система неоднократно модифицировалась с целью увеличения скорости и чувствительности анализа. В настоящее время предел обнаружения аминокислот составляет несколько пикомолей, а длительность анализа равна - 90 мин. Уменьшение разрешающей способности, которое является следствием увеличения скорости разделения, затрудняет или даже делает невозможным определение малораспространенных аминокислот. [19]
Для разделения смесей аминокислот, пептидов и белков Мартин и Синдж применили систему хлороформ - вода. В настоящее время большее значение имеют фенол, лг-крезол в смесях с водой и буферирующими веществами, такими, как фосфаты, аскорбиновая кислота и др. Применяют также органические основания в смесях со спиртами, водой и буферированные. Например, лутидин - этиловый спирт, лутидин - третичный амиловый спирт, лутидин - третичный амиловый спирт - вода, пиколин, коллидин, коллидин с буфером, пиридин - амиловый спирт и др. Бутиловый спирт применяют в смесях с уксусной кислотой, бензиловым спиртом, аммиаком, монохлоргидрином гликоля, третичным бутиловым спиртом и с другими веществами. Применяют также смесь метилоксида с муравьиной кислотой, смесь ацетона с водой и мочевиной. Для обнаружения аминокислот применяют обычный групповой реагент - нингидрин, позволяющий обнаруживать кроме аминокислот пептиды, белки и первичные амины. [20]