Обнаружение - антибиотик
Cтраница 1
 |
Сравнительная хромате рамма антибиотиков в системах. бутапол, насыщенный водой ( /, и 100 % - ный метанол II. [1] |
Обнаружение антибиотиков на хроматограммах проводилось визуально, а также по свечению в ультрафиолетовом свете. [2]
Обнаружение макролидных антибактериальных антибиотиков на хроматограммах обычно производят биоавтографическим методом, в качестве тест-микробов используют грамположитель-ные бактерии. Для обнаружения на хроматограммах антибиотиков группы эритромицина и близких веществ ( содержащих 2-де-зоксисахара) предложена реакция с 0 5 % - ным раствором ванилина в 1 М перхлорной кислоте. После прогревания при 75 появляются сине-серые пятна на белом фоне. [3]
Для обнаружения антибиотиков на хроматограммах могут быть использованы различные биологические, химические и физические методы. Наиболее общие из них биоавтографические, поскольку они основаны на главном свойстве антибиотиков, а именно, на способности подавлять рост микроорганизмов. Эти методы и будут рассмотрены первыми. [4]
Методы обнаружения антибиотиков на протяжении ряда лет практически не претерпели никаких изменений. Обычно они включают биоавтографию с помощью чувствительных к данному антибиотику микроорганизмов, посеянных на агаре, или проявление хроматограмм путем их опрыскивания растворами соответствующих реагентов с последующим просмотром при УФ-освещении. Для обнаружения антибиотиков наиболее пригоден метод биоавтографии, суть которого заключается в следующем. Высушенную бумажную хроматограмму, тонкослойную пластинку или электрофореграмму прижимают к поверхности агара, содержащего культуру подходящего микроорганизма, и выдерживают в течение определенного времени. За время инкубации число бактерий увеличивается лишь в тех участках агара, которые не соприкасались с антибиотиком. По положению зон, в которых подавляется рост бактерий, определяют значения Rf соединений, проявляющих свойства антибиотика. [5]
Наиболее общими способами обнаружения антибиотиков на хроматограммах можно считать биоавтографические методы, позволяющие выявить антибиотики среди большого числа самых различных веществ. Это обстоятельство дает возможность использовать хроматографию на бумаге при проведении разнообразных исследований. [6]
Клайн и Голеб [408] разработали простую и изящную методику обнаружения антибиотиков. [7]
Поскольку бумажную и тонкослойную хроматографию применяют в сочетании с колоночной хроматографией, например для проверки гомогенности отдельных компонентов, биоавтографию можно считать общим методом обнаружения антибиотиков. Биоавтография основана на способности антибиотиков подавлять развитие чувствительных к ним штаммов. В результате разделяемые вещества обнаруживаются на хроматограмме по зонам подавления. [8]
К настоящему времени открыто очень много самых различных ( и химически и биологически) антибиотиков, поэтому невозможно предложить какую-то универсальную систему для их хроматографии. Для обнаружения классических антибиотиков разработаны были в свое время химические цветные реакции, но обычно их обнаруживают методом биоавтографии. [9]
Биоавтографические методы позволяют обнаружить антибиотик даже в том случае, если он содержится в препарате в незначительном количестве и к тому же в смеси с другими веществами. С этой точки зрения такие методы можно считать прямыми способами обнаружения антибиотиков на хроматограммах в отличие от химических и физических, которые являются косвенными. Биоавтографические методы можно применять уже тогда, когда об изучаемом антибиотике известно лишь, что он подавляет определенные тест-микробы. [10]
В эту группу входят методы обнаружения биологически активных соединений. В биоавтографических методах при обнаружении стимуляторов роста или витаминов определяется степень роста зон микроорганизмов, а при обнаружении антибиотиков или антиметаболитов - степень их ингибирования. К сожалению, эти весьма специфические методы требуют очень много времени - от нескольких часов до нескольких дней. Обнаруживаются такими методами только биологически активные соединения, причем неактивные соединения обнаружению не мешают. Чтобы ускорить получение результатов, обычно проводят обнаружение одним из химических методов, после чего проводят биологическую пробу. [11]
Методы обнаружения антибиотиков на протяжении ряда лет практически не претерпели никаких изменений. Обычно они включают биоавтографию с помощью чувствительных к данному антибиотику микроорганизмов, посеянных на агаре, или проявление хроматограмм путем их опрыскивания растворами соответствующих реагентов с последующим просмотром при УФ-освещении. Для обнаружения антибиотиков наиболее пригоден метод биоавтографии, суть которого заключается в следующем. Высушенную бумажную хроматограмму, тонкослойную пластинку или электрофореграмму прижимают к поверхности агара, содержащего культуру подходящего микроорганизма, и выдерживают в течение определенного времени. За время инкубации число бактерий увеличивается лишь в тех участках агара, которые не соприкасались с антибиотиком. По положению зон, в которых подавляется рост бактерий, определяют значения Rf соединений, проявляющих свойства антибиотика. [12]
Страницы: 1