Cтраница 4
Каплю пробы наносят на один конец пластинки и получают восходящую хроматограмму по методу, описанному для получения бумажной хроматограммы. Развитие хроматограммы проводят в закрытом сосуде, насыщенном парами проявителя. Пластинку затем сушат и опрыскивают реагентом для обнаружения компонентов или чаще всего подвергают действию паров иода. Коричневые пятна указывают на положение растворенного вещества; идентификацию проводят на основе длин пробега. [46]
Обнаружение окрашенных соединений обычно не представляет труда. В некоторых случаях, если окраска недостаточно интенсивна, можно применить опрыскивание реактивами, увеличивающими чувствительность обнаружения компонентов, что делают, например, при обнаружении окрашенных каротеноидных альдегидов. Уин-терстейн и Хегедус [1, 2] нашли, что чувствительность обнаружения этих соединений можно повысить, если опрыскивать хроматограммы вначале спиртовым раствором роданина, а затем концентрированным водным раствором аммиака или гид-роксида натрия. [47]
Анализируемые вещества вводятся в колонку при помощи соответствующих дозирующих устройств. Колонка продувается газом-носителем, не адсорбируемым и не растворяемым неподвижной фазой. При движении по колонке происходит разделение анализируемой смеси, причем фракции выходят из колонки вместе с газом-носителем. Обнаружение компонентов смеси, после прохождения ими адсорбента, производится на основе измерения их физических или химических свойств. Результаты замеров регистрируются непрерывно путем отсчета или при помощи автоматического самописца. Таким образом получают график зависимости измеренных величин во времени. [48]
Помимо атомных спектров, возбуждаются спектры недиссоциированных молекул активных газов: азота, углерода, кислорода. Молекулы этих газов могут также образоваться в разряде. Интенсивностью линий определяемых элементов можно управлять, изменяя диаметр трубки или давление газа. Таким способом подбирают условия, благоприятные для обнаружения заданных компонентов смеси. С уменьшением давления повышается температура электронов, а следовательно, и интенсивность линий трудновозбудимых элементов. С уменьшением диаметра трубки при том же токе и давлении увеличивается концентрация электронов. [49]
Препаративная хроматография имеет своей целью получить некоторые или все компоненты разделяемой смеси в очищенном виде для дальнейшего исследования или использования. В этом случае каждая из разделенных зон после выхода из хроматографической системы должна попасть в отдельный приемник. При наличии непрерывного контроля за выходящей из системы подвижной фазой можно менять приемники после окончания выхода из системы каждой зоны. При жидкостной хроматографии, особенно при разделении очень сложных смесей биополимеров, для обнаружения компонентов приходится проводить специальный анализ проб выходящего из колонки элюата. В этом случае целесообразно собирать элюат в отдельные небольшие фракции и после анализа содержимого каждой из фракций объединять те, которые содержат интересующие экспериментатора вещества, и подвергать их последующей обработке. [50]
Обычно считают, что ионизационные детекторы значительно менее чувствительны к изменениям температуры и колебаниям скорости потока газа-носителя, чем термические детекторы. Кроме того, отношение сигнала к шуму настолько велико, что нет надобности в сравнительных ячейках. Благодаря исключительно высокой чувствительности ионизационные детекторы всегда используют в капиллярной хроматографии. Не следует забывать, однако, и того, что ионизационные детекторы могут быть исключительно полезными и в сочетании с набивными колонками, в особенности для обнаружения компонентов, присутствующих в следовых количествах, или при анализе очень небольших проб. Кроме того, ионизационные детекторы обычно совершенно нечувствительны или малочувствительны к парам воды и неорганическим газам, так что эти вещества часто не мешают определению. Ионизационный детектор, соединенный последовательно или параллельно с термическим детектором, дает ценные сведения, если его используют для определения компонентов, присутствующих в следовых количествах, а термический детектор - для определения основных компонентов смеси. [51]
Для этой цели разработан ряд схем, работа по которым связана с систематическим разделением компонентов. Это систематический анализ, Вначале с помощью подходящих групповых реагентов выделяют отдельные группы компонентов. Потом производят разделение в рамках каждой группы и, наконец, получают растворы, в которых может находиться только по одному компоненту. Эти растворы используют для обнаружения компонентов с помощью подходящих реакций. Обычно для этой цели применяют избирательные ( селективные) реагенты, которые могут взаимодействовать с ограниченным числом ( 2 - 3 - 5) компонентов. Так как все мешающие компоненты отделены, селективные реакции в данных условиях становятся специфическими реакциями обнаружения. Тщательное соблюдение предписаний методики систематического анализа обеспечивает получение надежных результатов даже малоопытными аналитиками. Однако этот способ анализа сравнительно длителен и трудоемок. [52]