Cтраница 4
Для определения константы скорости инактивации Са - АТФазы НБД-хлоридом проводят модификацию SH-групп в той же среде, которая используется для определения кинетических характеристик SH-групп ( с. Реакцию начинают добавлением НБД-хлорида. По ходу реакции каждые 0 5 - 5 мин в зависимости от условий реакции отбирают аликвоты объемом 20 - 50 мкл и вносят их в 1 мл среды для определения активности Са - АТФазы ( с. Образующийся неорганический фосфат определяют методом Ратбуна и Ветлах ( с. Объем отбираемой пробы и время инкубации при определении активности подбирают заранее Ингибирующим действие НБД-хлорида в ходе измерения активности фермента можно пренебречь, учитывая разведение ингибитора и высокую концентрацию АТФ в среде инкубации. [46]
После установления стационарного режима работы колонки при бесконечном флегмовом числе примерно через 2 часа берут пробу ( 1 - 2 мл) из верхней части колонки. Эту пробу не используют. Определяют концентрацию и продолжают через каждый час отбирать пробы до тех пор, пока не будет достигнут постоянный состав в верхней части колонки и в кубе. Во избежание нарушения стационарного режима в колонке объем отбираемых проб должен быть минимальным. В коротких колоннах после отбора пробы обычно быстрее восстанавливается стационарное состояние, чем в высоких колонках с большим числом теоретических тарелок, поэтому иногда интервалы между отборами проб должны быть лначительно больше часа. [47]
После установления стационарного режима работы колонки ири бесконечном флегмовом числе примерно через 2 часа берут пробу ( 1 - 2 мл) из верхней части колонки. Эту пробу не используют. Определяют концентрацию и продолжают через каждый час отбирать пробы до тех пор, пока не будет достигнут постоянный состав в верхней части колонки и в кубе. Во избежание нарушения стационарного режима в колонке объем отбираемых проб должен быть минимальным. В коротких колоннах после отбора пробы обычно быстрее восстанавливается стационарное состояние, чем в высоких колонках с большим числом теоретических тарелок, поэтому иногда интервалы между отборами проб должны быть значительно больше часа. [48]