Определение - стероид
Cтраница 1
Определение стероидов, содержащих 21 атом углерода, основано чаще всего либо на восстановительных свойствах а-кетольной или гликолыюй группы, либо па присутствии Л4 - 3-кетонной группы, либо на реакции с фенилгидразином в случае 17 21-диокси - 20-кетостероидов. К первому случаю относится образование формазанов, которые определяются колориметрически. Применяя эти методы, Таучстон и Чжен Теп-су получили 97 % - ный выход, считая на исходное количество а-кетолстероидов. Другой возможностью является реакция с тетразолием, которую проводят в пробирке после элюирования пятен стероидов, сравнивая полученный результат с образцом, поскольку неравномерное опрыскивание часто способствует образованию различных артефактов, даже если берут поправку на слепой опыт с опрыскиваемой бумагой. Важным условием для всех методов количественного анализа является тщательное элюирование пятен с бумаги. [1]
Для определения стероидов в элюате подвергают анализу отдельные фракции или их аликвотные количества методами УФ-спектрометрии или колориметрии после добавления соответствующего реактива. В автоматизированной аналитической хроматографии наиболее часто применяют для детектирования методы спектрофотометрии и рефрактометрии. В классическом исполнении каждую фракцию испаряют досуха, после чего определяют вес полученного остатка. Однако в настоящее время полученные фракции подвергают обычно тонкослойной хроматографии. Для этого несколько микролитров каждой фракции наносят в начале широкой тонкослойной пластины, на которой затем проводят разделение. Как правило, при этом методе детектирования применяют распыление концентрированной серной кислоты или ее раствора в метаноле ( 30 %) и диэтиловом эфире с последующим подогревом пластины. В аналитических целях ( в оснащенных лабораториях) элюат может подвергаться непрерывному анализу с помощью водородного пламенно-ионизационного детектора при непрерывном отборе части элюата. Во многих исследованиях применяются меченые стероиды, которые детектируются в элюате на основе определения их радиоактивности. [2]
Реагенты с относительно высокой удельной радиоактивностью широко используют в определениях стероидов и стсрипов, содержащихся в экстрактах биологических жидкостей, путем ацетили-рования гидроксильных групп этих соединений. Концентрации - тих соединений в таких экстрактах очень низки, так что в пробе может содержаться менее 1 мкг анализируемого соединения. В анализируемых объектах присутствуют первичные, вторичные и третичные гидроксильные группы, а некоторые стероиды ( например, гидрокортизон) могут содержать гидроксильные группы исех трех типов. Поскольку в анализируемых образцах содержатся лишь микро - или полу микроколичества соединений с гидроксильными группами, для их определения лучше всего подходят методы с использованием двух радиоактивных изотопов. Один - сравнительный изотоп - служит для определения количества производною, выделенного с помощью хроматографии, а второй - индикаторный изотоп - позволяет установить выход определяемого соединения, степень превращения и чистоту продукта. [3]
Реагенты с относительно высокой удельной радиоактивностью широко используют в определениях стероидов и стеринов, содержащихся в экстрактах биологических жидкостей, путем ацетили-рования гидроксильных групп этих соединений. Концентрации этих соединений в таких экстрактах очень низки, так что в пробе может содержаться менее 1 мкг анализируемого соединения. В анализируемых объектах присутствуют первичные, вторичные и третичные гидроксильные группы, а некоторые стероиды ( например, гидрокортизон) могут содержать гидроксильные группы всех трех типов. Поскольку в анализируемых образцах содержатся лишь микро - или полумикроколичества соединений с гидроксильными группами, для их определения лучше всего подходят методы с использованием двух радиоактивных изотопов. Один - сравнительный изотоп - служит для определения количества производного, выделенного с помощью хроматографии, а второй - индикаторный изотоп - позволяет установить выход определяемого соединения, степень превращения и чистоту продукта. [4]
Реагенты с относительно высокой удельной радиоактивностью широко используют в определениях стероидов и стсрипов, содержащихся в экстрактах биологических жидкостей, путем ацетили-рования гидроксильных групп этих соединений. Концентрации - тих соединений в таких экстрактах очень низки, так что в пробе может содержаться менее 1 мкг анализируемого соединения. В анализируемых объектах присутствуют первичные, вторичные и третичные гидроксильные группы, а некоторые стероиды ( например, гидрокортизон) могут содержать гидроксильные группы исех трех типов. Поскольку в анализируемых образцах содержатся лишь микро - или полу микроколичества соединений с гидроксильными группами, для их определения лучше всего подходят методы г использованием двух радиоактивных изотопов. Один - сравнительный изотоп - служит для определения количества производною, выделенного с помощью хроматографии, а второй - индикаторный изотоп - позволяет установить выход определяемого соединения, степень превращения и чистоту продукта. [5]
Определение синтетического стероида бА - метил - Ш - ацетоксипро-гестерон в виде сложного эфира 3-энол-гептафторбутирата при 220, НФ OV-I7 на газ-хроме Q, детектор электронно-захватный. [6]
Хроматограмму на несколько минут помещают в закрытый сосуд, на дне которого находятся кристаллики йода. Этот способ рекомендуется для определения стероидов, алкалоидов и многих других соединений. Особенно интенсивный тон окраски дают четвертичные аммонийные и сульфониевые соли, такие, как холин и тиамин. [7]
 |
Разделение ароматических углеводородов, парафинов, олефинов и. [8] |
Стероиды успешно анализируются на обоих типах жидко-жидкостной распределительной системы. Во многих случаях для разделения одной и той же смеси компонентов может быть использована любая система. Возможность изменять хроматографическую систему особенно важна при определении стероидов в маслах, помадах и кремах, в которых составные компоненты могут мешать определению тех стероидов, концентрация которых низка. [9]
 |
Реагенты для карбонильной группы альдегидов и кетонов. [10] |
О-Бензилгидроксиламин и О - н - Бутилгидроксиламин [49] находят применение, в частности, в анализе кетостероидов в сложных биосубстратах. При такого рода анализах пики других соединений смеси могут перекрывать пики О-метилоксимов кетостероидов, затрудняя их идентификацию. В последнем случае в качестве реагентов выбирают О-алкилгидроксиламины с более высокой массой, которые часто элюируются после других компонентов смеси. О-Бензи - локсимы чаще всего используют при определении стероидов в моче человека. [11]
Проводят сравнение хроматографических профилей бактериальных жирных кислот со стандартными профилями, хранящимися в памяти компьютера. Этот метод применим для всех чистых культур бактерий. По сравнению с традиционными методами микробиологической идентификации этот метод занимает меньше времени и более экономичен. На рис. 8 - 26 представлены хроматограммы градуировочного стандарта и образца бактерий. В принципе, описанный метод может быть применен и в других областях, где требуется получить профиль метаболитов, например при определении стероидов или органических кислот в моче. [12]
Как радиоактивный реагент ( радиореагент) для определения первичных и вторичных гидроксильных групп уксусный ангидрид имеет много преимуществ. В пиридине реакция ангидрида ( в избытке) с этими группами протекает быстро и часто количественно при комнатной температуре; при повышенных температурах можно обеспечить по существу полную этерификацию. Полученное соединение можно метить как изотопом 14С, так и тритием, что особенно ценно при использовании метода с двумя изотопами. При этом для реагентов, меченных тритием и изотопом 14С, можно получить удельные активности более 2 Ки / мМ ( кюри на миллимоль) и до ОД Ки / мМ соответственно, что обеспечивает высокую чувствительность метода. Помимо этого с помощью перегонки полученное соединение можно легко отделить от нелетучих примесей. Меченый уксусный ангидрид является ионным реагентом для определения стероидов и стеринов в микро - и макроколичествах, а также макроколичеств многих других соединений с гидроксильными группами. [13]
Как радиоактивный реагент ( радиореагент) для определения первичных и вторичных гидроксильных групп уксусный ангидрид имеет много преимуществ. В пиридине реакция ангидрида ( в избытке) с этими группами протекает быстро и часто количественно при комнатной температуре; при повышенных температурах можно обеспечить по существу полную этерификацию. Полученное соединение можно метить как изотопом 14С, так и тритием, что особенно ценно при использовании метода с двумя изотопами. При этом для реагентов, меченных тритием и изотопом 14С, можно получить удельные активности более 2 Ки / мМ ( кюри на миллимоль) и до 0 1 Ки / мМ соответственно, что обеспечивает высокую чувствительность метода. Помимо этого с помощью перегонки полученное соединение можно легко отделить от нелетучих примесей. Меченый уксусный ангидрид является ценным реагентом для определения стероидов и стеринов в микро - и макроколичествах, а также макроколичеств многих других соединений с гидроксильными группами. [14]
Как радиоактивный реагент ( радиореагент) для определения первичных и вторичных гидроксильных групп уксусный ангидрид имеет много преимуществ. В пиридине реакция ангидрида ( в избытке) с этими группами протекает быстро и часто количественно при комнатной температуре; при повышенных температурах можно обеспечить по существу полную этерификацию. Полученное соединение можно метить как изотопом 14С, так и тритием, что особенно ценно при использовании метода с двумя изотопами. При этом для реагентов, меченных тритием и изотопом 14С, можно получить удельные активности более 2 Ки / мМ ( кюри на миллимоль) и до ОД Ки / мМ соответственно, что обеспечивает высокую чувствительность метода. Помимо этого с помощью перегонки полученное соединение можно легко отделить от нелетучих примесей. Меченый уксусный ангидрид является ионным реагентом для определения стероидов и стеринов в микро - и макроколичествах, а также макроколичеств многих других соединений с гидроксильными группами. [15]
Страницы: 1 2