Cтраница 1
Определение цистеина всегда было трудной задачей, так как результат очень часто зависит от используемого метода. На результат оказывают влияние такие факторы, как реагент, рН, буфер, доступность SH-групп для реагента, а также степень денатурации. [1]
Для определения цистеина 43 к раствору, содержащему 0 15 - 1 8 мг цистеина, добавляют 6 5 мл ацетатного буфера, 2 мл ФВК и оставляют смесь на 30 мин при температуре 20 С. [2]
Для определения цистеина 45 к раствору, содержащему 0 15 - 1 8 мг цистеина, добавляют 6 5 мл ацетатного буфера, 2 мл ФВК и оставляют смесь на 30 мин при температуре 20 С. [3]
Мешают определению цистеина иодиды ( при содержании более V5 от содержания цистеина в молях), цинк, кадмий, кобальт и медь. [4]
Наконец, для определения цистеина и цистина используется реакция с нитропруссидом натрия и цианистым натрием в спир-тово-щелочной среде, в ходе которой образуется вишнево-красная окраска. Реакция не является строго специфичной. [5]
Если в качестве колориметрического реагента для определения цистеина используется 2 4-динитрофторбензол и, то при значениях рН 5 5 реагирует только меркапто-группа с образованием 5 - ( 2 4-динитро-фенил) - цистеина, имеющего максимум поглощения при 320 нм. Меркаптосоединения реагируют с фторпирувиновой кислотой с образованием продуктов, поглощающих при 265 - 275 нм. [6]
Чаще всего фосфорновольфрамовым методом пользуются для определения цистеина и цистина. Поэтому ниже приведено описание метода определения этих соединений. [7]
Помещают образец, содержащий от 0 3 до 1 мг цистина, в пробирку, доливают серную кислоту до концентрации 0 05 М и 1 каплю 1 % - ной амальгамы натрия. Оставляют стоять на V2 часа при частом взбалтывании. Затем раствор переносят в стакан емкостью 150 мл, содержащий приблизительно 25 мл аммиачного буфера, освобожденного от кислорода, и титруют, соблюдая условия, указанные при определении цистеина. [8]
Методы анализа белковых макромолекул селективны и осуществляются в зависимости от того, какая структура является объектом исследования, и начинаются с определения аминокислотного состава. Для этого необходимо провести полный гидролиз пептидных связей и получить смесь, состоящую из отдельных аминокислот. Так как для гидролиза пептидных связей изолейцина и валина этого может быть недостаточно, проводят контрольный 48 - и 72-часовой гидролиз. Некоторые аминокислоты, например триптофан, при кислотном гидролизе разрушаются, поэтому для их идентификации используют гидролиз при помощи метансульфоновой кислоты в присутствии триптамина. Для определения цистеина белок окисляют надмуравьиной кислотой, при этом цистеин превращается в цистеиновую кислоту, которую затем анализируют. Выделение и идентификацию аминокислот проводят при помощи аминокислотных анализаторов, принцип действия которых основан на хроматографическом разделении белкового гидролизата на сульфополистирольных катионитах. В основе количественного определения той или иной аминокислоты лежит цветная реакция с нингидрином, однако более перспективным следует считать метод, при котором аминокислоты модифицируют в производные, поглощающие свет в видимом диапазоне. Разделение смеси аминокислот проводят при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии, а само определение - спектрофотометрически. [9]