Пероксидаза - хрен
Cтраница 1
Пероксидаза хрена в действительности не является простым ферментом. По-видимому, у многих, если не у всех, высших растений имеется множество форм пероксидазы ( иногда их называют изоферментами) которые удается разделить методами электрофореза и ( или) хроматографии. Множественность форм пероксидазы можно сопоставить с неоднородностью, обнаруженной у гемогло-бинов ( разд. Подобные колебания в относительной концентрации изоферментов, возможно, связаны с различными и изменяющимися функциями пероксидаз в метаболизме растений. Природа неоднородности остается неясной. [1]
Пероксидаза хрена имеет молекулярный вес около 40 000, из которого 16 % приходится на углевод, и содержит один атом железа. Цитрохром с-пероксидаза имеет молекулярный вес 34 000 и содержит также один атом железа, но не содержит углевода. Этот фермент образован четырьмя субъединицами, каждая из которых содержит по одному атому железа. Проведены исследования механизма реакций при участии как бактериальных каталаз, так и каталаз млекопитающих. Все они проявляют сходную активность. [2]
А с пероксидазой хрена, количество которой определяется по окрашиванию, возникающему при добавлении смеси 4-аминоантипирина и фенола. Этот анализ является типичным примером использования конструкции сэндвича, которая в этом случае состоит из антигена, специфического антитела и вспомогательного белка А, несущего метку. Меченый компонент, предназначенный для иммунохимического анализа, можно также использовать в конкурентном варианте. [3]
Каталаза обнаруживает поразительное сходство с пероксидазой хрена в реакции восстановления ее нитритом, зависящей от присоединения протона. [4]
Окисление восстановленного пиридиндинуклеотида ( NADH), катализируемое пероксидазой хрена. [5]
Кентен и Манн ( 1949) показали, что пероксидаза хрена и других растений может катализировать окисление Мп до Мп в присутствии Н2О2 в результате циклической окислительно-восстановительной реакции. [6]
СУ - щественно не меняются в результате влияния белка в пероксидазе хрена ( и, вероятно, в других гемопротеинах, например в миогло-бине), однако белок в каталазе может существенно понизить скорость этих реакций за счет пространственных затруднений ( в 103 - 108 раз), если молекулы восстановителя достаточно велики. [7]
Среди них были желудочная и панкреатическая липазы, - глюкозидаза, са-хараза, инвертаза, панкреатическая амилаза, пероксидаза хрена и другие. [8]
 |
Схематическое изображение амперометрической ячейки с параллельным ( а и последовательным ( б подключением рабочих. [9] |
Именно к биохимическому анализу в настоящее время проявлен наибольший интерес и получены результаты, которые продвинули проточные методы в биохимию, медицину, фармацевтику и другие области, в которых они ранее не применялись. Так, для амперометрического детектирования глюкозы, этанола и аминокислот в ПИА используются электроды с иммобилизованными глюкозоксидазой, пероксидазой хрена, алко-гольоксидазой и др. Однако требования к работе таких электродов выше, чем при обычных измерениях. [10]
Этот фермент похож на другие пероксидазы при использовании таких субстратов, как гваякол, пирогаллол и аскорбиновая кислота, хотя активность хлоропероксидазы в отношении первого из этих субстратов в 10 раз ниже, чем пероксидазы хрена. Хлоропероксидаза похожа на каталазу в том отношении, что она тоже катализирует выделение кислорода из перекиси водорода, хотя и менее эффективно, чем каталаза ( активность около 2 / 6 активности каталазы при рН 4 5), а также в том, что она катализирует окисление этанола перекисью водорода в уксусный альдегид и, вероятно, в муравьиную кислоту. Таким образом, Хлоропероксидаза по своим каталитическим свойствам находится между каталазами и типичными перок-сидазами. Она несколько менее активна, чем пероксидаза хрена, при окислении таких субстратов, как гваякол, и несколько менее активна, чем каталаза, при разложении перекиси водорода. Кроме того, она катализирует реакции хлорирования, на которые каталаза и пероксидаза не влияют. [11]
С целью получения моноспецифической сыворотки проведена иммунизация животных полученными субстанциями. Для получения антител против морфина в течение 3 - х месяцев проводили гипериммунизацию 6 кроликов конъюги-рованным антигеном морфин - бычий сывороточный альбумин. Для этого на полистирольные планшеты сорбировали конъюгат морфин-альбумин, а количество связавшихся с ним антиморфиновых антител контролировали с помощью анти-видовых антител к иммуноглобулинам кролика, ковалентно связанных с пероксидазой хрена. Из этих антисывороток была наработана гамма-глобулиновая фракция антиморфиновых антител в количестве 20 мг. [12]
При попытке получить некоторые сведения о системе, разрушающей симазин, получены данные об активности ферментов в выжатом растительном соке. Рот показал, что активность пе-роксидазы, определенная методом с применением малахитового зеленого [96], значительно выше в кукурузе, чем в просе и пшенице. С другой стороны, активность каталазы в кукурузе и просе значительно ниже, чем в пшенице и в других относительно чувствительных к симазину растениях. Высокое содержание перок-сидазы является, по-видимому, одним из решающих факторов, определяющих устойчивость кукурузы к воздействию симазина. Рот [80] установил, что другим фактором, способствующим процессу разрушения симазина, является присутствие в растениях фенолов. Автору удалось экстрагировать из растений кукурузы фенольную фракцию, очень близкую по составу к полифенольной фракции, способную in vitro метаболизировать симазин. При помощи хроматографии на бумаге Рот [80] локализовал определенное пятно [ растворитель н-бутиловый спирт - уксусная кислота - вода в отношении ( объемные проценты) 40: 10: 50; Rf 0 78 ], что позволяет предположить, что он соответствует вполне определенному химическому соединению. Природные фенолы из относительно устойчивых к симазину растений, таких, как просо или Imperata cylindrica, разрушают симазин in vitro только в смеси с обычной продажной пероксидазой хрена. Необходимо также отметить, что лейкоформа малахитового зеленого окисляется пероксидазой хрена в течение короткого промежутка времени до хиноидного красителя в присутствии синтетических фенолов, например 2, 4-дихлорфенола. [13]
При попытке получить некоторые сведения о системе, разрушающей симазин, получены данные об активности ферментов в выжатом растительном соке. Рот показал, что активность пе-роксидазы, определенная методом с применением малахитового зеленого [96], значительно выше в кукурузе, чем в просе и пшенице. С другой стороны, активность каталазы в кукурузе и просе значительно ниже, чем в пшенице и в других относительно чувствительных к симазину растениях. Высокое содержание перок-сидазы является, по-видимому, одним из решающих факторов, определяющих устойчивость кукурузы к воздействию симазина. Рот [80] установил, что другим фактором, способствующим процессу разрушения симазина, является присутствие в растениях фенолов. Автору удалось экстрагировать из растений кукурузы фенольную фракцию, очень близкую по составу к полифенольной фракции, способную in vitro метаболизировать симазин. При помощи хроматографии на бумаге Рот [80] локализовал определенное пятно [ растворитель н-бутиловый спирт - уксусная кислота - вода в отношении ( объемные проценты) 40: 10: 50; Rf 0 78 ], что позволяет предположить, что он соответствует вполне определенному химическому соединению. Природные фенолы из относительно устойчивых к симазину растений, таких, как просо или Imperata cylindrica, разрушают симазин in vitro только в смеси с обычной продажной пероксидазой хрена. Необходимо также отметить, что лейкоформа малахитового зеленого окисляется пероксидазой хрена в течение короткого промежутка времени до хиноидного красителя в присутствии синтетических фенолов, например 2, 4-дихлорфенола. [14]
Страницы: 1