Количество пероксидазы
Cтраница 2
Если рассматривать интенсивность выделения иода, которое получается при постоянных концентрациях иодистоводородной кислоты и возрастающих концентрациях пероксидазы, то и здесь при El наблюдается максимум, соответствующий концентрации иодистоводородной кислоты I, и при Fll - максимум, соответствующий концентрации иодистоводородной кислоты II. Если максимум достигнут при определенном количестве пероксидазы и иодистоводородной кислоты, то дальнейшее прибавление пероксидазы или иодистоводородной кислоты не оказывает никакого влияния на интенсивность выделения иода. Таким образом, пероксидаза, перекись водорода и иодистоводородная кислота участвуют в реакции в постоянных отношениях. [16]
Ввиду того что употреблявшийся нами для опытов экстракт обладал способностью после подщелачивания сравнительно быстро поглощать кислород из воздуха, описанное явление могло быть объяснено следующим: за время стояния на воздухе раствор поглощал атмосферный кислород и затем за счет этого кислорода и происходило окисление зимогена, из которого при этом образовывался фермент. Может быть, и то небольшое количество пероксидазы, которое появлялось в эвакуированных ампулах в основном опыте, всецело зависело именно от того, что раствор во время охлаждения, фильтрования и переливания в ампулы мог поглощать некоторое, хотя бы и небольшое, количество кислорода. [17]
К концу 1 - й минуты пероксидаза сохраняет еще во всех случаях свою полную активность. Количество превращенного вещества в точности пропорционально количеству пероксидазы в пределах ошибок опыта: функция от концентрации выражается прямой. К концу 2 - й минуты пропорциональность наблюдается только при концентрациях А - Е, к концу 3 - й минуты только при А-С, к концу 4 - й минуты только при А-В. [18]
Количество пероксидазы возрастает с той же закономерностью, как и интенсивность дыхания. Однако, когда интенсивность дыхания начинает падать, количество пероксидазы продолжает возрастать. [19]
Если действовать равными количествами перекиси водорода на пирогаллол в присутствии возрастающих количеств пероксидазы и взвешивать образующийся пур-пурогалин, то оказывается, что выше определенной границы дальнейшее прибавление пероксидазы не оказывает никакого влияния на количество реагирующего вещества. Аналогичная граница наблюдается также и для перекиси водорода, если применять постоянные количества пероксидазы и возрастающие количества перекиси водорода. Количество прореагировавшего вещества прямо пропорционально количеству перекиси водорода при избытке пероксидазы и количеству пероксидазы при избытке перекиси водорода. [20]
 |
Интенсивность выделения иода ( в см3 N гипосульфита. [21] |
Все сделанные до сих пор опыты, относящиеся к поведению пероксидазы при окислении иодистоводородной кислоты перекисью водорода, показали, что действие пероксидазы нарушается образующимися продуктами реакции. Соответственно этому и в конечном состоянии количество прореагировавшего вещества не прямо пропорционально количеству пероксидазы. [22]
В опытах I-VIII ( таблицы А и В) на 0.01 г пероксидазы и 0.01 г перекиси водорода получалось в среднем 0.020 5 г пурпурогалина. В опытах IX и X эта пропорциональность внезапно исчезала и, несмотря на то, что количество пероксидазы и перекиси водорода возрастало, количество образовавшегося пурпурогалина оставалось постоянным и равным приблизительно 0.165 г. Напрашивалось предположение, что применявшегося количества пирогаллола ( 1 г) было недостаточно для полного использования окислителя. [23]
Оказалось, что при избытке пероксидазы действие пропорционально количеству перекиси водорода, а при избытке перекиси водорода - прямо пропорционально количеству пероксидазы. Таким образом, пероксидаза и перекись водорода реагируют, невидимому, в постоянном отношении, с образованием промежуточного вещества. [24]
Тот факт, что активность пероксидазы уничтожается только сравнительно большими количествами солянокислого гидроксиламина, позволяет предположить, что здесь имеет место не отравление, а стехиометрическая реакция между пероксидазой и гидроксиламином. Уже неоднократно указывалось, что пероксидаза и перекись водорода всегда реагируют между собой в постоянных отношениях, и что количество перекиси водорода, которое может быть активировано данным количеством пероксидазы, можно довольно точно определить. [25]
Исследование влияния иода на активирующую способность пероксидазы было поставлено следующим образом: 160 см3 экстракта смешивались с 40 см3 раствора иода; через определенные промежутки времени к порциям по 25 см3 этой смеси прибавлялся пирогаллол ( 1 г в 45 см3 воды) и перекись водорода ( 30 см3 1 % - ного раствора); образующийся пурпурогалин взвешивался. Были поставлены три серии опытов, с возрастающими количествами иода и одинаковыми количествами пероксидазы, причем для каждой серии ставились контрольные опыты с соответственным количеством иода в отсутствии пероксидазы и с 20 см3 экстракта без прибавления иода. [26]
Если действовать равными количествами перекиси водорода на пирогаллол в присутствии возрастающих количеств пероксидазы и взвешивать образующийся пур-пурогалин, то оказывается, что выше определенной границы дальнейшее прибавление пероксидазы не оказывает никакого влияния на количество реагирующего вещества. Аналогичная граница наблюдается также и для перекиси водорода, если применять постоянные количества пероксидазы и возрастающие количества перекиси водорода. Количество прореагировавшего вещества прямо пропорционально количеству перекиси водорода при избытке пероксидазы и количеству пероксидазы при избытке перекиси водорода. [27]
Растительные пероксидазы до сих пор приготовлялись таким образом, что препараты, содержащие одновременно оксидазы и пероксидазы, нагревались до температуры разрушения окси-даз. Ввиду того что существуют растения, совершенно не дающие реакции на оксидазы, но содержащие значительное количество пероксидазы, Бах и Шода42 пытались найти такое растительное сырье, которое подходило бы для непосредственного приготовления пероксидазы. [28]
Пероксидаза активирует перекиси, в том числе и перекись водорода. Под ее действием происходит окисление различных фенолов и ароматических аминов. Этот фермент очень широко распространен в тканях растительного и животного происхождения. Наибольшее количество пероксидазы содержится в корнях хрена, редьки и ряда других корнеплодов. [29]
В настоящее время еще нельзя достаточно разобраться в теоретическом значении этих фактов. Я замечу только, что наблюдал при окислении о-крезола и салигенина образование муравьиной кислоты, которую можно характеризовать ее серебряной солью; это доказывает, что окисление вызывает отрыв боковой цепи. К сожалению, изучение этих реакций затрудняется тем, что необходимы большие количества пероксидазы для того, чтобы получать продукты окисления, достаточные для химического исследования; когда же требуется четыре месяца для приготовления нескольких дециграммов очищенного фермента, то поневоле приходится обращаться с ним экономно. Тем не менее, я пожертвовал тремя дециграммами своего самого чистого и самого активного фермента для того, чтобы решить вопрос о том, окисляется ли этиловый спирт системой пероксидаза - перекись водорода. Опыты были проведены в присутствии углекислого кальция для нейтрализации кислот, которые могут образоваться при окислении. [30]
Страницы: 1 2 3