Cтраница 2
Повидимому, при работе с очень малыми объемами пипетка Леви и самозаполняющаяся пипетка с прямым капилляром обладают приблизительно одинаковой точностью. В тех случаях, когда объем слишком мал для обычного переноса жидкости и ее взвешивания, наиболее серьезной проблемой, возникающей при использовании обеих пипеток, является их калибрирование. [16]
Калибрирование пипеток с самоустанавливающимся мениском проще всего может быть произведено взвешиванием пустой пипетки и пипетки, заполненной водой или йодистым метиленом, как это описано при калибрировании самозаполняющихся пипеток. В табл. 5 дан пересчет кажущегося веса воды, взвешенной на воздухе с помощью латунных разновесов, на ее истинный объем. Коэффициенты вычислены на основании данных, взятых из таблиц физико-химических величин. [17]
Самозаполняющиеся пипетки значительно труднее калибрировать, чем описанные выше капиллярные пипетки с метками, так как их внутренний диаметр меньше и, следовательно, их труднее заполнить ртутью. Кроме того, высоту столба ртути в самозаполняющихся пипетках кон - тролировать труднее, чем в обычных капиллярных пипетках с меткой. Поскольку 1 X воды весит 1 мг, что находится в соответствии с точностью взвешивания на микрохимических весах, пипетку емкостью 1 X можно откалибрировать, наполняя измеряемую часть капилляра чистой водой и взвешивая ее. С уменьшением объема точность этого метода калибрирования понижается. Если использовать чистый йодистый метилен, плотность которого равна 3 325, то ошибка взвешивания может быть значительно снижена, что позволит с достаточной точностью калибрировать пипетки объемом 0 25 X. Вследствие летучести йодистого метилена и воды взвешивание пипетки желательно производить в небольшом закрытом сосуде или закрывать концы пипетки в процессе взвешивания колпачками. [18]
В большинстве случаев пробы наносят в виде растворов в подходящем низкокипящем ( 50 - 100 С) растворителе, который должен быть относительно неполярным, чтобы хроматографи-руемые соединения имели бы в нем низкие значения Rf. Растворы проб наносят в виде пятен на хроматографические пластинки порредством микро-шприцев или микрошшеток различных типов, начиная от калиброванных пипеток, используемых в гематологии, и до самозаполняющихся пипеток известной емкости. Пробы для количественных определений рекомендуется наносить с помощью прецизионных микрошщжцев. [19]
Очевидно, что если в самозаполняющейся пипетке сделать расширение, то она перестанет заполняться автоматически. Однако, если втягивать жидкость в такую пипетку до тех пор, пока она не заполнит расширенную часть и мениск не достигнет сужения, то это даст возможность измерять зна - j zj чительно большие объемы с точностью самозаполняющихся пипеток. Устройство такой пипетки показано р ис. [20]
Для калибровки пипетку наполняют чистой водой, затем воду выпускают полностью, а пипетку быстро кладут в закрывающуюся трубку для взвешивания или в бюкс типа собачка ( см. рис. 57 6) и взвешивают. После этого ее снова заполняют водой и снова взвешивают. Разность между двумя взвешиваниями дает массу воды, вылитой из пипетки. Самозаполняющиеся пипетки калибруют при помощи ртути ( см. разд. [21]
Для проведения всех необходимых операций применяют небольшой блок из парафина или тефлона. На поверхность блока наносят в виде отдельных капелек различные реактивы, требуемые для проведения колориметрической реакции, в том числе каплю воды. Объем капли воды должен быть таким, чтобы общий объем раствора для колориметрирования составлял несколько меньше 50 X. Раствор, содержащий анализируемое вещество, объем которого измеряют самозаполняющейся пипеткой, вводят внутрь капли воды. Раствор с анализируемым веществом и реактивы собирают и перемешивают в требуемом соотношении с помощью пипетки емкостью 50 X. Перемешивание производят, наполняя пипетку и опорожняя ее на поверхность парафинового блока. После того как добавлен последний реактив и полученный раствор перемешан, наполняют пипетку до метки, втягивая в нее воду из отдельной капли, нанесенной на поверхность парафинового блока. Точно установив объем, проводят окончательное перемешивание, выдавливая несколько раз смесь, содержащуюся в пипетке, на свежую парафиновую поверхность и снова втягивая в пипетку. [22]
При проведении операции вольфрамовый плунжер продвигают вперед до тех пор, пока капля ртути не появляется на кончике капилляра. После этого кончик помещают в жидкий образец и плунжер двигают в обратном направлении, всасывая при этом некоторое количество образца в бюретку. Трубку снова помещают в сосуд с ртутью и выдавливают небольшое количество образца, чтобы удостовериться в отсутствии воздуха; после этого в капилляр набирают немного ртути до тех пор, пока мениск ртути не достигнет определенной метки на стекле. Устройство приводят в соприкосновение с диском из спекшейся стеклянной крошки, и плунжер медленно двигают с такой скоростью, чтобы образец с носика попадал на диск и не стекал в сторону. Эту операцию проводят до тех пор, пока определенное количество образца не будет введено и в систему напуска. Устройство медленно поднимают и опять вводят ртуть до той же метки. Разница в отсчетах на микрометре соответствует количеству введенного образца. При использовании этого устройства среднеквадратичное отклонение оказалось приблизительно равным 0 00001 мл; точность при этом по порядку равна точности введения при помощи самозаполняющейся пипетки. [23]