Cтраница 1
Плакальбумин был получен Линдерштрем-Лангом и Оттесоном [148] кристаллизацией из не содержащего соли раствора яичного альбумина, хранившегося в холодильнике в течение нескольких лет и загрязненного микробами, вероятно, Bacillus subtilts. [1]
Высказанные выше предположения следует считать предварительными, так как для полного объяснения превращения яичного альбумина в плакальбумин требуется большее количество сведений о химическом строении этих белков. Недавно Линдерштрем-Ланг [ 151е ] предложил несколько моделей структуры яичного альбумина, которые объясняют выделение указанных двух пептидов. В одной из моделей яичный альбумин и плакальбумин имеют свободную карбоксильную группу, но не имеют ни одной концевой аминогруппы, доступной для реактива Зангера. Согласно другой модели, плакальбумин в отличие от яичного альбумина содержит свободную концевую аминогруппу. [2]
Оттесен и Вилле [379] также успешно разделяли на крахмале пептиды, образующиеся при превращении яичного альбумина в плакальбумин. Однако в настоящее время наиболее перспективным методом разделения пептидов является, повидимому, применение ионообменных смол. [3]
Таким образом, при надлежащем использовании трех ферментов можно получить пять кристаллизующихся модификаций яичного альбумина, а именно Л2, А3 и три плакальбумина. [4]
За исключением содержания фосфора и характера подвижности, все три белка А, Л2 и Л3 обладают сходными свойствами. Как и в случае превращения яичного альбумина в плакальбумин, изменение подвижности, которым сопровождается процесс дефос-форилирования, можно использовать для оценки изменения суммарного заряда белков. Эти результаты показывают, что в удалении каждого из атомов фосфора принимают участие два способных ионизироваться атома водорода. Установление взаимосвязи между тремя формами яичного альбумина помогает объяснить электрофоретическую гетерогенность свежеприготовленных растворов этого белка и изменения, наблюдающиеся при старении. [5]
Сюда относятся исследования Анфин-сена и сотрудников [597, 598, 664], посвященные образованию яичного белка в яйцеводе курицы. Синтезированный в организме из С14О2 яичный альбумин расщепляли при помощи субтилизина на пластинчатый альбумин ( плакальбумин) и пептиды. Было найдено, что метка аспарагиновой кислоты в пептидах выше метки аспарагиновой кислоты плакальбумина. В аналогичных опытах с мечеными аминокислотами было отмечено неравномерное распределение метки в остатках глутаминовой кислоты, глицина, аланина и серина. Кроме того, в аналогичных опытах с другими биологическими системами были получены противоположные результаты. Стайнберг указал на то, что в опытах с биосинтезом овальбумина неравномерная метка аминокислот наблюдается лишь при сравнительно кратковременных опытах; если инкубирование продолжается в течение 10 час. [6]
Линдерштрем-Ланг и Отте-сон [1496] предположили, что подвижность двух компонентов яичного альбумина ( обозначенных буквами А и Л2) [ 151в ] можно объяснить, если предположить, что Л2 содержит только 1 атом фосфора на моль, тогда как основной компонент, А, содержит 2 атома фосфора. Проверяя эту гипотезу, Перлман [ 150а, 151 а ] показал, что после 14-дневного действия бактериального фермента при 37 плакальбумин состоит из двух электрофоретически различных компонентов Р и Р2, относительные количества которых соответствуют содержанию AI и А2 в свежеприготовленном яичном альбумине. При продолжительном выдерживании в термостате доля Р2 возрастает за счет убыли PI и появляется третий компонент, который фосфора не содержит. [7]
Действительно, было обнаружено, что при действии Вас. Было установлено, что при этом от яичного альбумина отщепляется небольшое количество азотистых веществ, в результате чего получается новый, родственный исходному белок, так называемый плакальбумин. [8]
Теперь остается лишь посмотреть, как эти три пептида укладываются в схему, предложенную Перлманом. Так как, согласно опубликованным данным [36], в яичном альбумине нет концевых групп, то в результате протеолиза должна образоваться открытая пептидная цепь, чем и объясняется повышенная растворимость плакальбуминов. При первом дефосфо-рилкровании этот, по общему мнению, циклический полипептид раскрыться не может, поскольку метод концевых групп достаточно точен для измерения количества А2, равного обычно 18 %; кроме того, А и А2 должны обладать почти одинаковой растворимостью. Однако Оттесон и Вилли [ 151 г ] показали, что скорости появления дипептида С и гексапептида А велики и соответствуют возрастанию растворимости, которым сопровождается превращение яичного альбумина в плакальбумин. В противоположность этому тетрапептид образуется с меньшей скоростью, которая не согласуется с изменением растворимости. К сожалению, измерить можно только скорости появления пептидов, а не точные их количества, причем даже эти относительные скорости различны у двух различных препаратов яичного альбумина. [9]
Высказанные выше предположения следует считать предварительными, так как для полного объяснения превращения яичного альбумина в плакальбумин требуется большее количество сведений о химическом строении этих белков. Недавно Линдерштрем-Ланг [ 151е ] предложил несколько моделей структуры яичного альбумина, которые объясняют выделение указанных двух пептидов. В одной из моделей яичный альбумин и плакальбумин имеют свободную карбоксильную группу, но не имеют ни одной концевой аминогруппы, доступной для реактива Зангера. Согласно другой модели, плакальбумин в отличие от яичного альбумина содержит свободную концевую аминогруппу. [10]
Сюда относятся исследования Анфин-сена и сотрудников [597, 598, 664], посвященные образованию яичного белка в яйцеводе курицы. Синтезированный в организме из С14О2 яичный альбумин расщепляли при помощи субтилизина на пластинчатый альбумин ( плакальбумин) и пептиды. Было найдено, что метка аспарагиновой кислоты в пептидах выше метки аспарагиновой кислоты плакальбумина. В аналогичных опытах с мечеными аминокислотами было отмечено неравномерное распределение метки в остатках глутаминовой кислоты, глицина, аланина и серина. Кроме того, в аналогичных опытах с другими биологическими системами были получены противоположные результаты. Стайнберг указал на то, что в опытах с биосинтезом овальбумина неравномерная метка аминокислот наблюдается лишь при сравнительно кратковременных опытах; если инкубирование продолжается в течение 10 час. [11]
Плакальбумин был получен Линдерштрем-Лангом и Оттесоном [148] кристаллизацией из не содержащего соли раствора яичного альбумина, хранившегося в холодильнике в течение нескольких лет и загрязненного микробами, вероятно, Bacillus subtilts. Отделяющиеся при ферментативном расщеплении осколки содержат глу-таминовую и аспарагиновую кислоты и не содержат других пептидных остатков, способных к ионизации. Электрофоретические свойства плакальбумина согласуются с предположением о потере двух сильных карбоксильных групп. [12]
Высказанные выше предположения следует считать предварительными, так как для полного объяснения превращения яичного альбумина в плакальбумин требуется большее количество сведений о химическом строении этих белков. Недавно Линдерштрем-Ланг [ 151е ] предложил несколько моделей структуры яичного альбумина, которые объясняют выделение указанных двух пептидов. В одной из моделей яичный альбумин и плакальбумин имеют свободную карбоксильную группу, но не имеют ни одной концевой аминогруппы, доступной для реактива Зангера. Согласно другой модели, плакальбумин в отличие от яичного альбумина содержит свободную концевую аминогруппу. [13]
С является дипептидом - аланилаланином. Эти результаты подтверждают гипотезу о том, что все три пептида, выделяющиеся при превращении яичного альбумина в плакальбумин, отщепляются по одному и тому же месту. [14]
Теперь остается лишь посмотреть, как эти три пептида укладываются в схему, предложенную Перлманом. Так как, согласно опубликованным данным [36], в яичном альбумине нет концевых групп, то в результате протеолиза должна образоваться открытая пептидная цепь, чем и объясняется повышенная растворимость плакальбуминов. При первом дефосфо-рилкровании этот, по общему мнению, циклический полипептид раскрыться не может, поскольку метод концевых групп достаточно точен для измерения количества А2, равного обычно 18 %; кроме того, А и А2 должны обладать почти одинаковой растворимостью. Однако Оттесон и Вилли [ 151 г ] показали, что скорости появления дипептида С и гексапептида А велики и соответствуют возрастанию растворимости, которым сопровождается превращение яичного альбумина в плакальбумин. В противоположность этому тетрапептид образуется с меньшей скоростью, которая не согласуется с изменением растворимости. К сожалению, измерить можно только скорости появления пептидов, а не точные их количества, причем даже эти относительные скорости различны у двух различных препаратов яичного альбумина. [15]