Полоса - хроматографическая бумага
Cтраница 1
 |
Схема прибора для электрофореза белков на бумаге. [1] |
Полоса фильтровальной хроматографической бумаги 3 размером 4 X 35 см, на которой происходит элек-трофоретическое разделение белков, находится в увлажненной камере 4, а концы ее погружены в электродные сосуды с боратн. [2]
Полосу хроматографической бумаги размером 9X35 см расчерчивают вдоль на три равные части и на расстоянии 3 см от нижнего края проводят поперечную линию, на которой в центре каждой полосы наносят пятно исследуемого раствора. [3]
Вырезают полосу хроматографической бумаги, намечают простым карандашом линию старта и на ней точки нанесения исследуемых веществ. [4]
Растворитель проходит путь около 25 см. Через 24 ч полосу хроматографической бумаги осторожно вынимают из камеры вместе с кюветой. Вынимают предметное стекло, удерживающее бумагу в кювете. Полоску бумаги подвешивают в вертикальном положении на толстую нить для подсушивания, предварительно отметив карандашом нижнюю границу фронта подвижной фазы. Пока бумага высыхает, готовят фотографическую кювету, в которую наливают 0 5 % - ный раствор нингидрина в безводном ацетоне слоем 3 - 4 мм. [5]
Микропипеткой отбирают 0 005 мл исследуемого раствора и наносят на стартовую линию полосы хроматографической бумаги. Строят градуировочные графики для определения никеля и кобальта. [6]
Полосу хроматографической бумаги ( 35X10 см) пропитывают 10 % - ным раствором парафина в бензоле и высушивают в горизонтальном положении между листами фильтровальной бумаги. [7]
Полосы бумаги не должны прикасаться к стенкам камеры. Каждую полосу хроматографической бумаги подвешивают в камере так, чтобы один конец ее был погружен в растворитель. [8]
Растворы веществ наносят на линию старта микропипеткой или микрошприцем так, чтобы расстояние между точками нанесения отдельных проб было не менее 3 см. Если минимально необходимое для проведения хроматографирования количество анализируемого раствора может образовывать на бумаге пятно, превышающее в диаметре 10 мм, нанесение проводят в несколько приемов, предотвращая путем подсушивания чрезмерное растекание пятна на линии старта. В рабочем положении полоса хроматографической бумаги должна висеть вертикально так, чтобы между ее верхним концом, погруженным в лодочку, и линией, старта был лишь один, по возможности плавный, перегиб. По окончании выдержки начинают хроматографирование, для чего в лодочку вливают подвижную фазу. [9]
Начинать работу следует с выбора оптимальной смеси растворителей. Для этого на полосы хроматографической бумаги пятнами наносят экстракты ( в расчете 0 05 - 0 2 г сухого вещества в пятно), которые подвергают разделению в ряде смесей растворителей. Хроматограммы проявляют указанными выше реактивами на индоль-ные и фенольные соединения. Последняя группа веществ обычно служит своеобразными маркерами, показывающими, удовлетворительно ли разделяются вещества на хроматограммах. [10]
Помещают подготовленную полоску верхним краем ( выше того места, где нанесены пятна) в узкое отверстие кюветы, предназначенной для подвижной фазы, и закрепляют поставленным на ребро предметным стеклом. Линия старта не должна находиться в кювете, а располагаться на расстоянии 4 см от верхнего ее края на свободно висящей части полосы хроматографической бумаги. [11]
Разделение проводят в камере для низковольтного электрофореза ( с. Кюветы заполняют цитратным буфером. Вырезают полосы хроматографической бумаги шириной 4 - 5 см и наносят на них тканевой экстракт и стандартные растворы нуклеотидов-свидетелей в количестве, соответствующем 0 1 - 0 15 мкмоль каждого нуклеотида Разделение проводят в течение 4 - 5 ч при градиенте напряжения 15 - 20 В / см и силе тока 0 5 мА на 1 см поперечного сечения бумажной полосы. Местоположение нуклеотидов идентифицируют в ультрахеми-скопе. [12]
Страницы: 1