К-фосфатный буфер
Cтраница 1
К-Фосфатный буфер - 10 мМ раствор, рН 7 5, содержащий 30 мМ KF и 3 мМ ЭДТА. [1]
В освобожденную от клеток культу-ральную жидкость добавляют К-фосфатный буфер ( рН 7 2) до концентрации 0 15 М, затем суспензию оксиапатита перемешивают на холоду в течение 3 ч, загружают в колонку, хорошо промывают тем же буфером и элюируют очищенный вирус 5 - 10 объемами колонки 0 5 М К-фосфатного буфера. [2]
X 7 5 см), уравновешенную 0 05 М К-фосфатным буфером ( рН 7), промывали тем же буфером до прозрачности элюата ( 428о 0), а иеспецифически сорбированные белки снимали 1 М раствором NaCl. [3]
Малатдегидрогеназа - коммерческий препарат, разводят перед использованием 100 мМ К-фосфатным буфером, рН 7 5, до конечной концентрации 60 инт. [4]
Состав реакционной смеси для проявления активности лактатде-гидрогеназы в полиакриламидном геле: К-фосфатный буфер 100 мМ, рН 7 4; лактат натрия 100 мМ; НАД 0 5 мМ; феназинметосульфат 40 мкг / мл; тетразолий нитросиний 400 мкг / мл. [5]
Когда аффинный лиганд привязан к матрице ( например, в 0 2 М К-фосфатном буфере, рН 7 5), карбоксильные группы освобождаются ( либо в результате связывания с белком, либо из-за гидролиза в водной среде), и они придают сорбенту полианионные свойства. [6]
В освобожденную от клеток культу-ральную жидкость добавляют К-фосфатный буфер ( рН 7 2) до концентрации 0 15 М, затем суспензию оксиапатита перемешивают на холоду в течение 3 ч, загружают в колонку, хорошо промывают тем же буфером и элюируют очищенный вирус 5 - 10 объемами колонки 0 5 М К-фосфатного буфера. [7]
Состав реакционной среды объемом 3 мл: 100 мМ К-фосфатный буфер, рН 7 5; L-аспартат 30 мМ; а-кетоглутарат 5 мМ; НАДН 0 1 мМ; малат-дегидрогеназа 1 инт. Контрольная проба не содержит L-аспартат. [8]
Например, аликвоты ДНК, рена-турирующей при температуре отжига, переводили в 0 156 М К-фосфатный буфер и смешивали с суспендированной в том же буфере кашицей оксиапатита, затем перемешивали в течение 15 мин и центрифугировали в настольной центрифуге. Выход однонитевой ДНК определяли в супернатанте, а всю остальную ДНК считали ренатурировавшей и сорбированной на оксиапатите. [9]
Проводился диализ экстракта фермента ( 0 5 мл), содержащего 81 Е фосфофруктокиназы, 20 Е или 18 7 мг / мл алкогольдегидрогеназы, против 10 мМ К-фосфатного буферного раствора ( рН 6 8); затем раствор пропускался через колонку с замещенной AMP-сефарозой. Элюиро-вание осуществлялось в линейном градиенте концентрации ( 0 - 1 моль / л) КС1 ( общий объем элюата 40 мл) в 10 мМ К-фосфатном буфере; скорость потока 0 4 мл / мин. [11]
Изучают влияние НАД, пирувата и АДФ на флуоресценцию аура-мина О, связанного с ЛДГ. Для этого вначале снимают спектр флуоресценции раствора, содержащего 0 04 мМ апо - ЛДГ и 0 15 мМ аура-мина О в 0 1 М К-фосфатном буфере ( рН 7 0), содержащем 5 мМ ЭДТА, а затем добавляют к пробе лиганды в следующих конечных концентрациях: 6 мМ НАД, 6 мМ пируват, 9 мМ АДФ. Регистрируют увеличение флуоресценции комплекса аурамина О с ЛДГ под действием использованных соединений. Ставят контроль, в котором учитывают влияние добавок на флуоресценцию зонда в отсутствие белка. Рост интенсивности эмиссии связанного с белком аурамина О может быть обусловлен либо увеличением его количества, либо изменением флуоресцентных характеристик зонда. [12]
Для ответа на поставленный вопрос проводится титрование комплекса ЛДГ с аурамином О нарастающими концентрациями НАД. Проба содержит апо - ЛДГ и аурамин О в конечных концентрациях 45 мкМ и 0 15 мМ соответственно. Эксперименты проводят в 0 1 М К-фосфатном буфере ( рН 7 0), содержащем 5 мМ ЭДТА, при 20 С. Длина волны возбуждения - 480 нм, интенсивность флуоресценции измеряют при 517 нм. В качестве контроля используют пробу, в которой к тем же концентрациям ЛДГ и аурамина О добавляют буфер вместо раствора НАД. Таким образом получают экспериментальную кривую зависимости флуоресценции от концентрации НАД. [13]
Полиэтиленимин они закрепляли на силикагеле с диаметром пор 330 А и размером зерна 5 мкм. В модельных опытах разделение белков на колонке размером 0 46 X X 25 см осуществляли элюцией линейным градиентом концентрации ( 0 025 - 0 5 М) К-фосфатного буфера ( рН 6 8) со скоростью 1 мл / мин. [14]
Получение препарата II изозима гексокиназы. К растворимой клеточной фракции добавляют при помешивании суспензию ДЭАЭ-целлю-лозы из расчета: 1 мл фракции - 5 - 10 мг сухой ДЭАЭ-целлюлозы. После 10-минутной инкубации суспензию фильтруют с помощью водоструйного насоса на воронке Бюхнера. Осадок ДЭАЭ-целлюлозы с адсорбированной гексокиназой промывают К-фосфатным буфером, содержащим 40 мМ К. Затем гексокиназу элюируют 200 мМ К. [15]
Страницы: 1