Ингибиторный анализ

Cтраница 1

Ингибиторный анализ применяют также в сочетании с турбидимет-рическими методами. Например, в строго фиксированных условиях при наличии соответствующих контрольных смесей сочетание этих методов может с успехом заменить описанный выше количественный метод, сложность которого заключается в необходимости определения содержания азота в преципитате, образованном конканавалином А и полисахаридом. Как и в предыдущем случае, для проведения анализа пригоден практически любой полисахарид, специфически осаждающий конканавалин А. Ниже приведены три примера турбидиметрической методики, различающиеся прежде всего природой используемого полисахарида. [1]

В настоящее время ингибиторный анализ ферментов является не только методом качественной идентификации функциональных групп, имеющих отношение к каталитической активности. Он находит все большее применение для количественной оценки реак-ционноспособности, выяснения особенностей строения активных центров. [2]

Активный центр фермента ( схема ( по Малеру и Кордесу. [3]

При помощи методов ингибиторного анализа были предприняты попытки установить закономерности состава и структуры активных центров у ферментов, относящихся к разным группам. [4]

Следует отметить, что в гаптенном ингибиторном анализе углеводов может быть использован любой полисахарид, образующий с кон-канавалином А специфический преципитат. [5]

Дыхательные цепи Azotobacter vinelandii ( A, Micrococcus lyso. [6]

Последовательность их расположения, представленная на рис. 94, подтверждается различного рода данными: значениями окислительно-восстановительных потенциалов переносчиков, ингибиторным анализом. [7]

Природу компонентов дыхательной цепи и порядок их расположения определяли химическими, физико-химическими и биохимическими методами, среди которых важное место занимают дифференциальная спектрофотометрия и ингибиторный анализ. Их сочетание позволяет определить, какие именно компоненты участвуют в окислении данного субстрата и какова последовательность их расположения в дыхательной цепи. [8]

Однако уровни концентраций в таких системах, как правило, не сохраняются постоянными ( в отличие от регу-ляторных систем, рассмотренных в предыдущей главе), и потому ингибиторный анализ для этих систем легче проводить, исследуя влияние не на общую скорость процесса, а на концентрации промежуточных продуктов. Концентрации субстрата ингибированной реакции, как и концентрации субстратов предшествующих реакций, должны увеличиваться, а концентрации продуктов ингибированной реакции и всех последующих стадий - уменьшаться. Идентификация промежуточного соединения, концентрация которого при - ингибировании остается неизменной, позволяет установить, на какую стадию процесса действует ингибитор. [9]

Сравнивая медленную бесфакторную транслокацию с быстрой EF-G GTP-катализируемой транслокацией, важно отметить, что фактор, по-видимому, не снижает заметным образом тепловую энергию активации процесса; это наводит на мысль, что здесь катализ имеет преимущественно энтропийную природу. Ингибиторный анализ также показывает, что фактор не создает нового реакционного пути, идущего через промежуточные стадии в обход высокого активационного барьера, как это делает обычный энтальпийный катализатор: самые различные специфические ингибиторы транслокации ( БИОМИЦИН, спектиномицин, эритромицин, неомицин, канамицин, гентамицин, гигромицин В) действуют как на энзиматический, так и неэнзиматический процесс, указывая на существование одинакового транслокационного механизма, с одними и, теми же мишенями в обоих случаях. Следовательно, фактор элонгации катализирует процесс, скорее всего, путем создания лучших пространственных условий в рибосоме для того же самого, присущего рибосоме как таковой, транслокационного пути. Одним из способов сделать это могла бы быть простая фиксация одного из термически флуктуирующих под-состояний рибосомы, которое было бы благоприятно для транслокации. Такой фиксирующий или ориентирующий эффект присоединения EF-G как крупного дополнительного лиганда рибосомы кажется вероятным. [10]

Реакции, катализируемые различными классами ферментов. [11]

Идентификация аминокислотных остатков, входящих в активный центр того или иного фермента, осуществляется различными методами. Так, применение ингибиторного анализа дает возможность выявить функциональные группы, отвечающие за проявление ферментативной активности. Локализация активного центра возможна также при применении протеолитических ферментов, гидролизующих молекулу фермента на отдельные фрагменты. [12]

Однако участие в этих реакциях цитохрома Р-450 было доказано посредством ингибиторного анализа. [13]

Схема переноса электронов в дыхательной цепи ( места действия ингибиторов указаны жирными стрелками. [14]

Перенос электронов от субстратов цикла трикарбоновых кислот к кислороду, сопровождающийся образованием воды, осуществляется сложной полиферментной системой, локализованной во внутренней мембране митохондрий. Последовательность функционирования отдельных дыхательных переносчиков в значительной мере была выяснена благодаря применению ингибиторного анализа, а также спектрофотометри-ческих исследований. [15]

Страницы: 1 2