Постановка - реакция
Cтраница 2
Эта молекула, экспрессируемая и на других клетках ( NK-клетках, например), может взаимодействовать с другой адгезивной молекулой CD58, которая экспрессирована на поверхности почти всех клеток организма. В недавнем прошлом эти свойства широко использовали для постановки реакции Е - розеткообразования с целью подсчета общего количества Т - лимфоцитов. [16]
В реакцию берут цитохолевый АГ Вакса-Витебского, который разводят на 2 % растворе хлористого натрия по титру. Смесь встряхивают и экспонируют при комнатной температуре 10 мин для созревания. Постановка реакции: на предметное стекло наносят две капли активной или инакти-вироваяной ( при 56 - 30 мин) исследуемой сыворотки я одну каплю АГ; стекло встряхивают в течение 30 с или 3 мин, выдерживают еще 10 - 16 мин и затем читают реакцию. При отрицательной реакции капля остается гомогенно мутной. [17]
 |
Титрование сыворотки, на антикомплементарность. [18] |
Оттитрованные ингредиенты ( антиген, комплемент, гемолитическая сыворотка) разводят физраствором таким образом, чтобы рабочая доза их содержалась в объеме ОД мл. В подсобном ряду пробирок разводят инактивированную прогреванием исследуемую сыворотку. При постановке реакции вначале смешивают исследуемую сыворотку, антиген и комплемент. Смесь выдерживают в термостате при температуре 37 в течение часа. [19]
Постановка реакции с применением бумажных дисков сводится к следующему. Капилляром тастеровской пипетки агар равномерно распределяют по говерхности стекла. Далее на поверхность агара накладывают шамбированным пинцетом предварительно пропитан-ше соответствующими антигенами и сыворотками бу-лажные диски диаметром от 5 до IQ мм. Для постановки реакции требуется 3 - мин. Диски обычно заранее вырезают из фильтроваль-юй бумаги, стерилизуют и хранят в пробирке, флаконе ми чашке Петри. [20]
Реакция преципитации происходит вскоре после смешивания растворов антигена и иммунной сыворотки. Преципитация обычно завершается через 24 ч инкубации в холодильнике. При постановке реакции иммунодиффузии, когда соединение реагентов происходит лишь после их диффундирования в поддерживающей среде ( например, в агаре), время образования преципитата, помимо прочих моментов, зависит от скорости диффузии. [21]
Прежде чем вводить химическое соединение в реакцию, необходимо подобрать концентрации, добавление которых не вызывало бы денатурацию сывороточных белков и тем самым не имитировало бы образования специфического преципитата. При подборе таких концентраций используют свежую сыворотку или плазму крови здоровых людей или больных из контрольной группы ( с аллергозами другой этиологии), двукратные водные разведения гаптена и те же объемы обоих ингредиентов системы, что и при постановке самой реакции. Однако в отличие от основного опыта при подборе концентраций каждый раствор гаптена добавляют к новой порции сыворотки или плазмы. После установления максимальной концентрации, не вызывающей денатурации белков, готовят из нее восемь двукратных рабочих разведений гаптена, которые проверяют с новой порцией сыворотки или плазмы уже по схеме постановки реакции. В табл. 43 приведены примеры подбора концентраций для ряда химических аллергенов. [22]
Страницы: 1 2