Cтраница 1
Приготовление мазков, их окраску и другие микробиологические манипуляции осуществляют на заранее подготовленном рабочем месте. На столе должны находиться только материалы и предметы, необходимые для данного исследования, а именно: изучаемый объект ( кровь, гной, мокрота, кал и др.), пробирки или чашки с культурой микроорганизмов, стерильная водопроводная вода или ИХН, штатив для бактериологической петли, банки с чистыми обезжиренными предметными стеклами и карандашами по стеклу. Помимо этого, необходимы газовая горелка или спиртовка, растворы красителей, ванночка с подставкой ( мостик) для стекол, промыватель с водой, пинцет, фильтровальная бумага, банка с дезинфицирующим раствором, используемым для обезвреживания отработанных препаратов и пипеток. [1]
Существенное время занимает приготовление мазков, их окрашивание и микроскопирование. Созданы автоматы для окрашивания мазков на предметных стеклах, которые опускают стекла последовательно в различные реагенты и высушивают. [2]
Наиболее распространенным методом исследования является приготовление тонкого мазка, окрашенного по Цилю - Нильсену. Ввиду кислотоустойчивости ооцисты криптоспоридии окрашиваются в красный цвет, подавляющее большинство других микроорганизмов - в голубой. Ооцисты представляют собой округлые образования диаметром около 5 мкм ( см. цв. Для того чтобы не допустить переобесцвечивания при окраске методом Циля - Нильсена, рекомендуется использовать 1 - 3 % - ю серную кислоту и не применять кислотно-спиртовое обесцвечивание. Для окрашивания биоптатов используют обычные гистологические красители. [3]
Известно несколько методических разработок, в которых подробно описано взятие крови или костного мозга у животного, приготовление мазка, фиксация и окраска. [4]
Наиболее информативный метод диагностики висцерального лейшманиоза - микроскопия мазков костного мозга, пунктата лимфатических узлов и селезенки, окрашенных по Романовскому - Гимзе. В процессе приготовления мазков из-за повреждения этих клеток лейшманий освобождаются и располагаются внеклеточно или в обрывках цитоплазмы разрушенных клеток. [5]
При окрашивании жгутиков большое внимание необходимо обращать на чистоту стекла и способ нанесения препарата. Стекло рекомендуется промывать хромовой смесью, а потом дистиллированной водой. Перед приготовлением мазка сухое стекло следует погрузить в спирт, а затем провести через пламя горелки той стороной, на которую будет нанесен мазок. Наносить мазок следует на охлажденное стекло. Разведение исследуемого материала производят в небольших пробирках. Осторожно захватывая петлей ( не обжигая ее), берут небольшое количество бактерий и опускают в пробирку с 5 - 6 мл стерильной водопроводной воды той же температуры, при которой выращивался микроб. Взбалтывать не следует, бактерии сами переходят в воду. [6]
Для приготовления препаратов необходимы совершенно чистые предметные стекла. Их кипятят в растворе двухромовокалиевой соли в крепкой серной кислоте, затем дважды промывают в растворе едкого натра. После этого стекла промывают водой и помещают для хранения в банку с 96 % - ным спиртом. Перед приготовлением мазка следует сильно нагреть ту сторону стекла, на которую будет нанесен мазок, но наносят его на охлажденное стекло. [7]
На предметном стекле отмечают площадь, равную 1 см2, и на этой площади капля за каплей выпаривают 1 мл воды. Мазок фиксируют и окрашивают 10 % эритрозином на 5 % карболовой воде. Подсчет микроорганизмов проводят аналогично предыдущим методам. Слабой стороной всех перечисленных методов является их относительная длительность, сложность приготовления мазков и недостаточная точность результатов. [8]