Cтраница 4
Распределительная хроматография занимает промежуточное положение между адсорбционной хроматографией и хроматографией на обращенных фазах. Распределительные системы предпочтительны при разделении членов гомологического ряда. Оптические изомеры удается разделить только в форме пар диастереомеров ( см. рис. VI.21), что в общем не представляет трудностей. Для расщепления рацематов в принципе пригодны оптически активные подвижные фазы. Подобные фазы для классической колоночной хроматографии известны только в форме производных целлюлозы [2, 3], для жидкостной хроматографии при высоком давлении они не пригодны. Область применения ионообменной хроматографии ограничена, так как использовать можно лишь чисто водные системы. В таких системах можно разделять те ионы или соединения, которые легко и обратимо образуют комплексы ( обмен лигандов) с ионами, связанными с ионообменником. Кроме того, на органической матрице ионообменника может также происходить неионообменная сорбция. Если в системах с ионообменниками к водным элюентам добавляют органические растворители, то элюенты разделяются и образуется распределительная система. [46]
Первый осадок содержит все у-глобулшы, другие глобулины и следы альбумина. Очищают фракцию у-глобули-нов вторым и третьим осаждениями. После третьего осаждения растворяют осадок в боратном буфере ( рН 8 45) до конечного объема 20 - 25 мл. Удаляют сульфат аммония диализом при 4 С против боратного буфера в течение 2 - 3 дней со сменой буфера утром и вечером. Полученный после диализа препарат иммуноглобулинов обычно содержит небольшой осадок денатурированного белка и слегка опалесцирует. В полученном препарате проверяют содержание белка и титров антител. Определяют белковый состав методом электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии ДСН ( с. Если полученный препарат у-глобулинов не отвечает требованиям эксперимента по тсготе, проводят дальнейшую очистку с применением ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-цел-люлозе. [47]