Cтраница 1
Примесь белков удаляется при помощи трихлоруксусной кислоты ( ТХУ): полисахарид растворяют в 5 - 10 % - нойТХУ, отделяют белковый коагулят центрифугированием, а затем из раствора осаждают полисахарид спиртом. Иногда такие переосаждения полисахарида из раствора в ТХУ повторяют. Более щадящим является метод Севага: при обработке раствора полисахарида хлороформом с амиловым спиртом белок собирается на поверхности раздела хлороформ - водный раствор. Пользуются и рядом других реагентов и методов для удаления белков: фосфорновольфрамовой кислотой, нагреванием, действием протеоли-тических ферментов, сорбцией белков на каолине и других сорбентах. [1]
Следует всегда помнить о том, что примеси основных белков в препаратах ДНК также увеличивают уровень фона. Возрастание уровня фона за счет загрязнений препаратов ДНК определяют, проводя при 4 ложную гибридизацию, для чего используют ДНК фильтры и РНК с нулевым фоном. При этой температуре за короткий срок ( 1 - 2 дня) гибриды не образуются, однако сорбция ДНК, обусловливающая возрастание фона, происходит нормально. Независимо от методики гибридизации и обнаружения гибрида препараты ДНК должны быть свободны от следов РНК-азы. [2]
Дальнейшую очистку ферментного препарата, содержащего в небольших количествах примеси белков, сходных по физико-химическим свойствам с ферментом, ведут методом ионообменной хроматографии. Белки в ионообменном процессе взаимодействуют с ионитом и при помощи электростатического взаимодействия связываются с его поверхностью. [3]
Выделение углевод-белковых полимеров является сложным процессом вследствие трудности отделения примеси белков или полисахаридов. [4]
При экстрагировании каучука ацетоном из каучука удаляются смолы, в том числе и естественные противостарители; поэтому экстрагированный каучук, а также чистый каучук, лишенный примесей белков и смол, окисляются довольно легко. В начальной стадии окисления натуральный каучук становится липким, после присоединения 0 5 - 1 0 % кислорода весь каучук размягчается. При дальнейшем окислении, когда каучук поглотит 12 - 25 % кислорода, он становится твердым и хрупким и на его поверхности образуются трещины. Характерно, что поглощение небольших количеств кислорода вызывает резкие изменения свойств каучука: понижается предел прочности при растяжении, средний молекулярный вес, вязкость его растворов, повышается пластичность и растворимость. [5]
Технический натуральный каучук при комнатной температуре подвергается относительно медленному окислению благодаря наличию в его составе естественных противостарителей. При экстрагировании каучука ацетоном из каучука удаляются смолы, в том числе и естественные противостарители; поэтому экстрагированный каучук, а также чистый каучук, лишенный примесей белков и смол, окисляются довольно легко. В начальной стадии окисления натуральный каучук становится липким, после присоединения 0 5 - 1 0 % кислорода весь каучук размягчается. При дальнейшем окислении, когда каучук поглотит 12 - 25 % кислорода, он становится твердым и хрупким и на его поверхности образуются трещины. Характерно, что поглощение небольших количеств кислорода вызывает резкие изменения свойств каучука: понижается предел прочности при растяжении, средний молекулярный вес, вязкость его растворов, повышается пластичность и растворимость. [6]
Депротеинизацию осуществляют рядом способов. Наиболее распространено удаление белков с помощью довольно мягкого метода Севага, основанного на обработке раствора полисахаридов, со-хержащего белок, хлороформом с добавлением бутанола либо пен-танола, что приводит к денатурации белка. Иногда примесь белка удаляют, растворяя полисахарид в 5 - 10 % - ном растворе трнхлор-уксусной кислоты и отделяя коагулирующий в этих условиях белок. В последнее время для этих целей применяют различные ферментативные препараты - протеазы. [7]
Для элюирования полисахаридов с колонок используют растворы солей или буферные растворы разной концентрации; прочно удерживаемые полисахариды элюируют разбавленными растворами щелочей. Таким способом легко удается отделить кислые полисахариды от нейтральных, например, пектиновую кислоту от сопутствующего ара-бинана 61 или сульфированные полисахариды водорослей от крахмало-подобных примесей62; в ряде случаев при таком способе разделения удается освободиться от примесей белка. Описано также успешное применение ЭК. [8]
Редкая мононенасыщенная к-та - эруковая [ лат. СН ( СН2) ПСООН ] представлена наполовину или выше в трех маслах: горчичном, рапсовом и сурепном. К неомыляемым примесям относятся витамины, углеводы. Примеси белков и углеводородов определяют вкус и запах масел. [9]
Гевея содержит каучук в виде млечного сока-латекса, наполняю - Лдего сосуды, расположенные в коре; сок добывают подсечкой. NB кислом растворе происходит свертывание - коагуляция - натурального каучука и образуется плотная масса, легко обрабатываемая на вальцах. Вальцеванием удается превратить каучук в тонкий лист и промыть водой для удаления примеси белковых веществ, которые в дальнейшем - могут вызвать неприятный запах и разрушение каучука. Если каучук провальцован до тонких пленок, то промывкой во - дои можно вымыть из него всю примесь белков. Такой каучук в виде пачки матовых кремового цвета слипшихся пленок носит название креп-каучук. Промывка толстых листов менее эффективна. Каучук сохраняет большое количество белков, которые удаляют из него методом окуривания. Такая обработка вызывает некоторое ухудшение свойств каучука и его потемнение. Этот, более низкий, сорт каучука назван смокедшитс. [10]
РНК очищалась многократной депротеинизацией с помощью фенола и додецилсульфата, сохраняя свою инфекционность при введении в растение. При этом удельная инфекционность снижается в 200 - 300 раз, если рассчитывать ее на единицу вирусной РНК. Следовательно, белковая оболочка вируса небезразлична для процесса заражения. Однако примесь белка в тщательно приготовленных препаратах была мала ( меньше 0 02 %), и электронный микроскоп показывал полное отсутствие вирусных частиц. Если какое-то количество белка и оставалось в препаратах, то это были денатурированные макромолекулы, неспособные образовать структуру вирусных палочек. [11]
Смесь центрифугируют, водный слой отделяют, а фенольный - промывают равным объемом воды. Объединенные водные вытяжки экстрагируют равным объемом хлороформа и затем диализуют 18 ч против 300-кратного объема дистиллированной воды. За время диализа дистиллированную воду трижды меняют. Раствор снова обрабатывают фенолом и хлороформом и диализуют. Полученный таким образом продукт не содержит примесей белка и нуклеиновой кислоты. [12]