Cтраница 1
Высокоэффективный способ неспецифического введения метки в молекулу органических соединений основан на методе Вильцбаха [23]: сухое соединение помещают в емкость, заполненную газообразным тритием, и создают такие условия, в которых энергия молекул превышает энергию связи углерод - водород. Однако этот метод, как правило, неприменим для метки углеводов. В указанных условиях происходит отщепление гидроксильных групп, эпимеризация и расщепление гликозидных связей полисахаридов, в результате чего в значительных количествах образуются радиоактивные примеси. Биологически активные полисахариды обычно теряют свою активность. Лучшие результаты, по-видимому, дает каталитический обмен. [1]
Применение гетерогенных катализаторов, таких, как платиновая чернь, приводит к неспецифическому введению метки. [2]
Идентификация аминокислот, присутствующих в активных центрах ферментов, разумеется, очень важна для понимания главных особенностей механизма ферментативных реакций. Существует ряд методов, с помощью которых можно идентифицировать хотя бы некоторые из аминокислотных остатков, участвующих в построении активного центра. Наиболее прямой метод состоит в присоединении к какому-нибудь аминокислотному остатку, входящему в состав активного центра, ковалентной метки, которая оставалась бы устойчивой в условиях деградации полипептидных цепей. С точки зрения такой возможности все ферменты можно разделить на два класса: в один из них входят ферменты, образующие в ходе каталитического процесса ковалентно связанные промежуточные фермент-субстратные производные, а в другой - ферменты, которые таких производных не образуют. Для ферментов первого класса проблема введения специфической метки в активный центр ( а не просто неспецифического введения метки в белок) часто решается путем использования в качестве носителей метки Либо обычных субстратов этих ферментов, либо соединений, структурно родственных субстрату. [3]