Cтраница 1
Прочность сорбции мРНК на поли ( и) - сефарозе, очевидно, зависит от длины ее полиадениловой цепочки. [1]
Степень прочности сорбции и десорбции на смоле разных аминокислот, определяемая главным образом величинами зарядов молекул, различна. Наиболее прочно на смоле сорбируются диаминокислоты и наименее прочно - дикарбоновые аминокислоты. Разделение аминокислот при ионообменной хроматографии происходит при десорбции их со смолы элюирующими буферными растворами, отличающимися от исходного буферного раствора большими величинами рН и ( или) ионной силы. [2]
Даже при оптимальном рН прочность сорбции вещества сильно зависит от концентрации в элюенте блокирующих заряды ионов соли. При малой их концентрации белок, например даже при двухточечной связи с обменником, практически не будет продвигаться по колонке. При чересчур большой концентрации контрионов белки не будут сорбироваться и быстро, не разделившись, выйдут из колонки. [3]
Как и сорбаты, растворители, применяемые в ВЭЖХ, различаются по прочности сорбции и силе взаимодействия с разделяемыми веществами. Одни из них способны смыть с колонки лишь слабосвязанные сорбаты, другие - вызывают десорбцию почти любых молекул. Ясно, что состояние равновесия в системе в конечном итоге определяется балансом межмолекулярных взаимодействий. В частности, молекулы подвижной фазы могут взаимодействовать с молекулами разделяемых веществ. Образующиеся ассоциаты, даже и очень нестойкие, почти неизбежно имеют сродство к сорбенту, отличающееся от сродства неассоциированных молекул. В результате ассоциации сорбция может стать менее или более прочной. С другой стороны, молекулы подвижной фазы могут конкурировать на поверхности сорбента с молекулами разделяемых соединений, вытесняя последние с активных центров и способствуя смещению равновесия в сторону десорбции. [4]
Разделение различных фракций РНК, ДНК и их гибридов основано на различии в прочности сорбции одно - и двухнитевых молекул нуклеиновых кислот; прочность сорбции фрагментов нуклеиновых кислот повышается с увеличением их длины. Десорбция вызывается увеличением концентрации фосфатного буфера. [5]
Описанная картина ионных взаимодействий веществ с обменником подсказывает два главных способа управления силой этих взаимодействий ( прочностью ионной сорбции), а следовательно, и значениями коэффициентов распределения компонентов смеси веществ между фазами, и возможностью их хроматографического фракционирования: во-первых, управление степенью ионизации ионогенных групп обменника и вещества путем вариации рН буфера и, во-вторых, регулирование степени блокирования их зарядов путем выбора концентрации соли в элюенте. Рассмотрим эти способы подробнее. [6]
Хроматографию на оксиапатите чаще используют не для фракционирования, а для очистки одного из компонентов смеси, заведомо отличающегося по прочности сорбции от остальных. [7]
Разделение различных фракций РНК, ДНК и их гибридов основано на различии в прочности сорбции одно - и двухнитевых молекул нуклеиновых кислот; прочность сорбции фрагментов нуклеиновых кислот повышается с увеличением их длины. Десорбция вызывается увеличением концентрации фосфатного буфера. [8]
На модельных олпгонуклоотпдах было показано, что прочность сорбции зависела от длины двунитевого участка модельного комплекса. [9]
Момент изменения окраски определяется изменением знака заряда этих частиц в так называемой изоэлектрической точке, которая практически совпадает с точкой эквивалентности. Четкость изменения окраски при титровании определяется соотношением прочности сорбции противоионов, присутствующих в адсорбционной слое и сорбция ионов индикатора. [10]
Статический или динамический характер носит при этом хроматографический процесс, зависит от прочности исходной сорбции белка и протяженности зоны его связывания по отношению к длине колонки. С этих позиций только что цитированный пример следует отнести к статическому типу хроматографии. [11]
Механизм действия этих индикаторов состоит в адсорбции красителя отрицательно-или положительно заряженной поверхностью частиц бро - мида серебра, сопровождающейся резким изменением цвета осадка, образующегося в процессе титрования. Момент изменения окраски определяется изменением знака заряда этих частиц в так называемой изоэлектрической точке, которая практически совпадает с точкой эквивалентности. Четкость изменения окраски при титровании определяется соотношением прочности сорбции противоионов, присутствующих в адсорбционном слое и сорбции ионов индикатора. [12]
Описанная картина изменения флуоресценции наблюдается для всех адсорбционных индикаторов, у которых флуоресцентной способностью обладает анион. Для индикаторов, у которых флуоресцентной способностью обладает катион, наблюдается обратная картина. Например, при титровании раствора нитрата серебра раствором хлорида натрия в присутствии родамина 6Ж в точке эквивалентности пропадает желто-зеленая флуоресценция, так как индикатор сорбируется мицеллой хлорида серебра лишь при избытке анионов хлора, когда мицелла заряжена отрицательно. Четкость работы адсорбционного индикатора зависит от соотношения прочности сорбции противоионов, присутствующих в адсорбционном слое, и индикатора. Это соотношение в свою очередь зависит от особенностей титруемого раствора, поэтому при титровании конкретных растворов индикатор следует подбирать опытным путем. [13]
Метод Фаянса отличается от приведенного выше тэм. Механизм действия этих индикаторов состоит в адсорбции красителя отрицательно или положительно заряженной поверхностью частиц йодида серебра, сопровождающейся резким изменением цвета осадка, образующегося в процессе титрования. Момент изменения окраски определяется изменением знака заряда этих частиц в так называемой изоэлектрической точке, которая практически совпадает с точкой эквивалентности. Четкость изменения окраски при титровании определи ется соотношением прочности сорбции противоионов, присутствующих в адсорбционном слое и сорбции ионов индикатора. [14]
При этом диаминоки-слоты, несущие два положительных заряда, сорбируются сильнее моноаминокислот. Кроме того, прочность связывания зависит от констант диссоциации групп NH. Затем проводят медленную элюцию аминокислот. Для этого используют буферные растворы с рН, при котором возникает частичная диссоциация карбоксильных и аминогрупп, в результате чего электростатическое взаимодействие с активными группами смолы ослабляется. При этом, естественно, они вымываются в последовательности, соответствующей различиям в прочности сорбции на смоле. Сбор элюата ведется малыми порциями, причем достигается четкое обособление отдельных аминокислот. [15]