Cтраница 1
Проявление специфичности этих солевых эффектов при ионной силе около 0 1 указывает на то, что в этой области становятся существенными эффекты среды, индуцированные солями и оказывающие влияние на коэффициенты активности у и утх - Кларке и Тафт [ 871 изучили специфичность влияния 34 солей на гидролиз яреж-бутилхло-рида при с л / 0 1 4 - 1 5 моль / л, использовав для этой цели весьма искуссный прием. [1]
Наиболее благоприятные условия для проявления специфичности и предотвращения денатурации определяются стехиометри-чеоким уравнением. Определение этих условий основано на литературных данных и мнениях ряда авторов обзорных статей. Однако выше уже подчеркивалось, что поведение какого-либо одного белка по отношению к определенному реагенту или к определенным условиям денатурации не обязательно совпадает с поведением другого белка. Низкие температуры в этом случае более предпочтительны вследствие того, что температурный коэффициент процесса денатурации белка гораздо выше, чем температурный коэффициент обычных химических реакций. Важность контроля рН подчеркивается условиями, приведенными в сносках к табл. 1 и указываемыми соответствующими уравнениями. Большинство реакций протекает в почти нейтральной области, что требует соответствующего буфе-рировакия реагирующей системы. В целом ряде приведенных ниже случаев специфичность групповых реагентов при изменении рН пропадает. Кроме того, в ряде случаев выделяющиеся низкомолекулярные продукты реакции могут катализировать новые реакции, денатурировать белок или иным образом влиять на не-забуференную систему. Продолжительность реакций варьирует от нескольких минут до нескольких дней. Если желательно полностью блокировать одну группу без изменения других, то для определения оптимальных условий необходимы предварительные опыты с каждым белком. Обычно нужные сведения получают, наблюдая за ходом реакции с помощью количественного анализа функциональных групп. [2]
Для растворов неэлектролитов почти отсутствуют прямые указания на проявление специфичности Е адсорбции микропримесей. Растворимость примесей хлоридов и оксихлоридоп меди [35], различных хлоридов и оксихлорида железа [36], алюминия [36], кальция [33] в четырех хлористом кремнии для области температур 25 - 50 С была сопоставлена с величиной адсорбции этих микропримесей из бинарных растворов в очищенном SiCU на особо чистом силикагеле при различных температурах. Между ад сорбируем остью вещества и его растворимостью в данном растворителе установлена прямая зависимость: адсорбируе-мость тем больше, чем меньше растворимость. [3]
В частности, - было отмечено уменьшение побочных реакций и проявление специфичности катализаторов. [4]
За последние десять лет был введен ряд новых реагентов и были исследованы условия, наиболее благоприятные для проявления специфичности реакции. В своем обзоре Олькотт и Френкель-Кон - рат уделили особое внимание группоспецифическим реагентам. [5]
Это краткое резюме одного из примеров показывает, что следует подбирать такие условия, которые являются наиболее благоприятными для проявления специфичности реакции, причем каждый белок необходимо изучать с помощью нескольких реагентов. В табл. 1, взятой из работы Олькотта и Френкель-Конрата [19], перечислены действующие на функциональные группы белков реагенты и указана их относительная реакционная способность в условиях максимальной специфичности. Относящиеся сюда подробности можно найти в соответствующей литературе. [6]
Каждый случай проявления специфичности неизбежно отражает взаимодействие между ферментом и субстратом. Например, любое изменение молекулы глюкозы приводит к значительному уменьшению скорости окисления ее альдегидной функциональной группы глюкозооксидазой. [7]
Сиаловая кислота [10], содержание которой изменяется от 1 до 18 %, также является компонентом многих препаратов, причем при высоком содержании ее в препарате наблюдается незначительное содержание ь-фукозы, и наоборот. Сиаловая кислота, которая, как полагают, не имеет существенного значения для проявления групповой специфичности А, В, О или Lea, скорее всего представляет собой N-аце-тилнейраминовую кислоту. [8]
Существует много ферментов, которые требуют присутствия всех или нескольких субстратов для проявления ферментативной активности в частичных реакциях или реакциях обмена. Если этот механизм необходим для проявления специфичности фермента, можно ожидать, что индуцирование напряжения или соответствия присутствием второго субстрата будет приводить к увеличению реакционной способности первого субстрата как по отношению к малым ненормальным реагентам, так и по отношению к нормальному реагенту. [9]
II, мягкие окислители, например иодозобензоат, порфириндин, феррицианид и иод, в определенных условиях являются весьма специфическими. Восстановители действуют только на дисульфидную группу, превращая ее в сульфгидрильную. Однако в тех случаях, когда не созданы максимально благоприятные условия для проявления специфичности, большинство белковых реагентов реагирует более чем с одной функциональной группой. Например, кетен, который часто применяется для ацетилирования аминогрупп, действует также я на фенольные и сульфгидрильные группы. В самом деле, Херриотт и Нортроп [20] в одной из прежних работ нашли, что у кристаллического пепсина первыми ацетшгируются аминогруппы. Несмотря на это, Ли и Кальман [48] обнаружили, что в лактогенном гормоне передней доли гипофиза ацетилируется 75 % фенольных и 35 % аминных групп. Стерн и Уайт [ ЗЗа ] установили то же самое в случае инсулина. Эти данные свидетельствуют о том, что исследование поведения какого-либо белка по отношению к данному специфическому реагенту нельзя иопользавать для суждения о соответствующем поведении других белков. В последующей работе, однако, Херриотту [ 49а ] удалось показать, что инактивация пепсина обусловлена ацетилированием именно фенольных групп тирозина. После обработки кислотой получают ацетилироваяный препарат пепсина, активность которого ( за вычетом всех тех ацетильных групп, которые лабильны при рН 10, и исходного количества фенольных групп тирозина) является 100 % - ной. [10]