Cтраница 1
Пуллуланаза, открытая в бактериях Aerobacter [184], действует аналогично изоамилазе. Она легко может быть выделена в чистом состоянии. Применяется для исследования строения ветвистых глюканов ( см. с. Пуллуланаза отличается фантастической термостабильностью: после нагревания при 100 С в течение 10 мин остается около 80 % активности. [1]
Однако бактериальная пуллуланаза имеет ограниченное применение для изучения гликогена, потому что хотя она и способна гидроли-зовать некоторые связи ветвлений в деградированном гликогене, она не действует или мало действует на недеградированную молекулу. Другой фермент этого типа - изоамилаза дрожжей [42] - гидролизу-ет ограниченную часть внутренних связей амилопектина и гликогена. [2]
Профиль элюции обработанного пуллуланазой амилопектина 3, помимо небольшого пика высокомолекулярного нерасщепленного материала, так же как и предыдущий полисахарид, дает два пика, но с другими средними длинами цепей, причем больший пик имеет более низкую степень полимеризации. [3]
В дальнейшем был открыт новый фермент - пуллуланаза, избирательно расщепляющий связи а - 1.6, который вместе с другими ферментами был применен для дальнейшего изучения строения а-глю-канов. [4]
Из ферментов микробного происхождения, катализирующих разрыв а-1 6-глюкозидных связей в крахмале, известны пуллуланаза, обнаруженная в бактериях Aerobacter aerogenes. При добавлении его к ферментам солода крахмал полностью гидролизуется. [5]
Пуллуланаза - фермент из Aerobacter aerogenes - гидролизует связи а-1 6 в ветвистых а-глюканах, расчленяя ветвистые структуры на линейные цепи. При совместном действии этих ферментов полностью расщепляются все цепи: 1) имеющие четное число глюкозных остатков с образованием мальтозы; 2) имеющие нечетное число остатков с образованием мальтозы и глюкозы. Последняя определяется специфически глюкозоксидазой. Средняя единица цепи вычисляется исходя из допущения, что полисахарид имеет одинаковое число цепей с четным и нечетным числом глюкозных остатков. [6]
Для проведения такого анализа традиционным путем необходимо химическими методами установить природу невосстанавливающего концевого остатка. Метод Ли и Вилана [63] основан на использовании двух ферментов. Один из них ( пуллуланаза) избирательно гидролизует а - ( 1 - 6) - связи в точках ветвления, что приводит к образованию линейных цепей из а - ( 1 - 4) - связанных остатков D-глюкозы. Эти цепи расщепляются вторым ферментом ( р-амилазой) с образованием мальтозы и D-глюкозы, возникающей при расщеплении цепей с нечетным числом остатков этого моносахарида. Количество D-глюкозы в гидролизате является мерой длины цепи, так как одна молекула глюкозы образуется из одной цепи с нечетным числом остатков этого сахара, и если допустить, что в полисахариде число цепей с четным и нечетным числом моносахаридных звеньев одинаково, то одна молекула D-глюкозы образуется из двух углеводных цепей. [7]
Пуллуланаза, открытая в бактериях Aerobacter [184], действует аналогично изоамилазе. Она легко может быть выделена в чистом состоянии. Применяется для исследования строения ветвистых глюканов ( см. с. Пуллуланаза отличается фантастической термостабильностью: после нагревания при 100 С в течение 10 мин остается около 80 % активности. [8]
Пуллулан представляет собой a - D-глюкановый полисахарид, состоящий из сс-1 - 6-мальтотриозных и небольшого числа маль-тотетраозных единиц. Он синтезируется Aureobacidium pullulans и образует прочные, упругие пленки и волокна, которые можно формовать. По сравнению с целлофаном и полипропиленом эти пленки мало проницаемы для кислорода. Пуллулан, возможно, найдет применение в качестве упаковочного материала или флюккулирующего агента в суспензиях глин в горной промышленности. Он устойчив к амилазам, но разрушается ферментом пуллуланазой. [9]
Гликоген, называемый также животным крахмалом и содержащийся в печени, мускульной ткани и в особенно больших количествах в моллюсках, является двойником крахмала в животном мире и играет роль депо питательных веществ и запасного углевода животных тканей. В незначительных количествах гликоген содержится также в грибах и дрожжах. Гликоге-ноподобные полисахариды встречаются также в зернах злаков и в бактериях. Молекулярная масса гликогена составляет от 400 тыс. до 4 млн ( по другим источникам от 270 тыс. до 100 млн); даже в одном препарате гликогена наблюдается широкий разброс по размерам молекул. При кислотном гидролизе гликоген превращается в D-глюкозу, так как является полисахаридом, образованным за счет а - ( 1 3) -, а - ( 1 4) - и а - ( 1 6) - глюкозидных связей, причем 1 6-связи возникают и в ветвях гликогена. Из-за большей степени разветвленное молекулы гликогена имеют более плотную, более компактную форму, чем молекулы амилопектина. Как и амило-пектин, гликоген гидролизуется а-амилазами до мальтозы и изомальтозы; 1 6-связи гликогена расщепляются бактериальным ферментом пуллуланазой. [10]
Гликоген, называемый также животным крахмалом и содержащийся в печени, мускульной ткани и в особенно больших количествах в моллюсках, является двойником крахмала в животном мире и играет роль депо питательных веществ и запасного углевода животных тканей. В незначительных количествах гликоген содержится также в грибах и дрожжах. Гликоге-ноподобные полисахариды встречаются также в зернах злаков и в бактериях. Молекулярная масса гликогена составляет от 400 тыс. до 4 млн ( по другим источникам от 270 тыс. до 100 млн); даже в одном препарате гликогена наблюдается широкий разброс по размерам молекул. При кислотном гидролизе гликоген превращается в D-глюкозу, так как является полисахаридом, образованным за счет а - ( 1 3) -, а - ( 1 4) - и а - ( 1 6) - глюкозидных связей, причем 1 6-связи возникают и в ветвях гликогена. Из-за большей степени разветвленное молекулы гликогена имеют более плотную, более компактную форму, чем молекулы амилопектина. Как и амило-пектин, гликоген гидролизуется а-амилазами до мальтозы и изомальтозы; 1 6-связи гликогена расщепляются бактериальным ферментом пуллуланазой. [11]