Cтраница 2
Обычно для анализа содержания миноров в тРНК используют тонкослойную хроматографию рибонуклеозидов, меченных тритием посредством периодатного окисления рибозы с последующим восстановлением диальдегида обработкой [ 3Ш - - NaBH4 ( метод Рандерата), или рибонуклеотидов, меченных фосфором с помощью Т4 - полинуклеотидкиназы. В первом случае из сферы анализа совсем выпадают миноры, метилированные по рибозе, а некоторые нуклеозиды, особенно тиолированные, разрушаются. Во втором случае ферментативное фосфорилирование идет неодинаково полно для различных миноров, что затрудняет проведение количественных анализов. Авторы тщательно отработали условия эксперимента, позволившего им в ходе одного хроматографи-ческого фракционирования на колонке Supelco C18 за 48 мин разделить 29 минорных нуклеозидов из тРНК бактериального происхождения. [16]
Рандерат [71] рекомендует сушить такие слои при комнатной температуре 12 час. Этот же автор наносит целлюлозный порошок без гипса в виде суспензии в ацетоне. Пластинки с нанесенным слоем высушивают 3 - 5 мин в токе теплого воздуха, после чего они сразу же пригодны к использованию. [17]
Согласно Тамму, Шапиро, Лифшицу и Чаргафу [88], дистиллированная вода пригодна для разделения методом хроматографии на бумаге пурин-и пиримидин-оснований и их нуклеозидов. Рандерат [69, 71], а также Рандерат и Струк [70] нашли, что вода обеспечивает также хорошее разделение на слое целлюлозы в течение 45 мин. [18]
Рандерат [73] считает это существенным преимуществом аналитической ионообменной хроматографии в тонком слое по сравнению с распределительной и адсорбционной хроматографией. [19]
Согласно Тамму, Шапиро, Лифшицу и Чаргафу [88], дистиллированная вода пригодна для разделения методом хроматографии на бумаге пурин-и пиримидин-оснований и их нуклеозидов. Рандерат [69, 71], а также Рандерат и Струк [70] нашли, что вода обеспечивает также хорошее разделение на слое целлюлозы в течение 45 мин. [20]
Рандерат [ 1а ] опубликовали обзоры по ТСХ нуклеозидов, нуклеотидов и оснований нуклеиновых кислот, а Шейту [2] принадлежит обзор по ТСХ олигонуклеотидов. Саукконен [3] обобщил данные работ по методам хроматографии свободных нуклеотидов. [21]
Рандерат [73] считает это существенным преимуществом аналитической ионообменной хроматографии в тонком слое по сравнению с распределительной и адсорбционной хроматографией. [22]
Согласно Тамму, Шапиро, Лифшицу и Чаргафу [88], дистиллированная вода пригодна для разделения методом хроматографии на бумаге пурин-и пиримидин-оснований и их нуклеозидов. Рандерат [69, 71], а также Рандерат и Струк [70] нашли, что вода обеспечивает также хорошее разделение на слое целлюлозы в течение 45 мин. [23]
Изомерные пуринмононуклеотиды успешно разделяют на слоях целлюлозы по методу Рандерата [71, 73], используя следующие, предложенные Маркхамом и Смитом [58] растворители. Растворитель треттг-амиловый спирт - муравьиная кислота - вода ( 30 20 10), впервые описанный Михельсоном [62], также обеспечивает, по Рандерату [71], за 120 мин прекрасное разделение нуклеотидов на целлюлозе. [24]
Изомерные пуринмононуклеотиды успешно разделяют на слоях целлюлозы по методу Рандерата [71, 73], используя следующие, предложенные Маркхамом и Смитом [58] растворители. Растворитель те / эет-амиловый спирт - муравьиная кислота - вода ( 30 20 10), впервые описанный Михельсоном [62], также обеспечивает, по Рандерату [71], за 120 мин прекрасное разделение нуклеотидов на целлюлозе. [25]
Для достижения сравнимых результатов с этой системой в случае слоя целлюлозы достаточно 90 мин, в то время как в случае силикагеля Г необходимо 150 мин. Щелочные растворители, конечно, не могут быть непосредственно использованы на силикагеле Г для разделения сильнокислых нуклеотидов. Рандерат [69] указывает, что добавка 15 г этилендиаминте-трауксусной кислоты на 200 мл растворителя улучшает разделение. [26]