Раствор - тирозин
Cтраница 2
Жидкость, смешанная с раствором тирозина, начинала медленно окрашиваться только по истечении 24 часов, в то время как проба, к которой была прибавлена перекись водорода, стала через 24 часа совершенно черной; для ее обесцвечивания потребовалось 23 см3 раствора пермангаиата. Таким образом, пероксидаза, содержащаяся в тирозиназе, почти не изменилась при хранении, в то время как соответствующая оксигеназа почти полностью исчезла. [16]
В 400 см3 прокипяченной и охлажденной в токе водорода воды было растворено 0.2 г тирозиназы из Russula delica, очищенной путем осаждения спиртом. Кроме того, был приготовлен таким же образом раствор тирозина, насыщенный при нагревании и не содержащий кислорода. [17]
К 100 мл прозрачной пробы ( или к меньшему ее объему, дополненному до 100 мл дистиллированной водой) добавляют 6 мл раствора малоновой кислоты. Смесь перемешивают и точно через 5 мин добавляют 2 мл раствора тирозина, снова перемешивают и точно через 10 мин измеряют оптическую плотность. [18]
 |
Прибор для приготовления стандартных растворов С1О2. [19] |
К 100 мл прозрачной пробы ( или к меньшему ее объему, дополненному до 100 мл дистиллированной водой) приливают 6 мл - раствора моноэтиламина. Смесь перемешивают и точно через 2 мин добавляют к ней 2 мл раствора тирозина, после чего снова перемешивают. [20]
В две пробирки отмеривают по 1 мл полученного фильтрата; содержимое одной пробирки кипятят в течение 1 - 2 мин и затем охлаждают под струей водопроводной воды. В обе пробирки Добавляют по 0 5 - 1 0мл 0 1 % - ного раствора тирозина, содержимое пробирок перемешивают и пробирки помещают в; термостат при 37 - 40 С. Время от времени пробирки энергично встряхивают для лучшего соприкосновения с воздухом. Постепенно в одной пробирке под действием тирозиназы жидкость темнеет за счет образований окрашенных в черный цвет продуктов окисления тирозина типа меланинов. В контрольной пробирке, где фермент инактивирован нагреванием, цвет жидкости не изменяется. [21]
Реакция обусловлена присутствием в белке циклической аминокислоты тирозина, которая при взаимодействии с реактивом Миллона дает ртутную соль своего нитропроизвод-ного, окрашенную в красный цвет. Белки, не содержащие тирозина ( желатина, клупеин, сальмин и др.), не дают реакции Миллона. Если реакцию Миллона производят с раствором тирозина или с растворами полипептидов, содержащих тирозин, то осадок не образуется, но жидкость равномерно окрашивается в красный цвет. Эту реакцию широко используют для количественного определения тирозина в гидро-лизатах белка и для определения некоторых производных тирозина, дающих эту реакцию. [22]
Страницы: 1 2