Cтраница 2
Обработку исходным буферным раствором осуществляют до тех пор, пока не произойдет выравнивания рН элюата на выходе из колонки ( или жидкости, в которой суспендируют ионит) с рН исходного буферного раствора. Для его ускорения ионит можно сначала обработать раствором того же состава, что и исходный, но с большей концентрацией, а после достижения нужного значения рН уравновешивание продолжают исходным раствором. Другой способ уравновешивания заключается в том, что ионит суспендируют в исходном буферном растворе до получения достаточно жидкой суспгнзии. Добавлением раствора, содержащего соответственно кислый или основной компонент исходного буфера, доводят рН ( на рН - метре) до нужного значения. Затем сорбент уравновешивают исходным буферным раствором. Во всех случаях конечное состояние равновесия ( величину рН) необходимо контролировать. [16]
Раствор белка, наносимый на колонку, должен иметь тот же состав и те же значения рН и ионной силы, что и исходный буферный раствор, которым уравновешен ионообменник. Образец переводят в исходный буферный раствор, подвергая его предварительно диализу или гель-хроматографии. Если объем пробы, предназначенный для ионообменной хроматографии, невелик, образец можно развести исходным буферным раствором. Нерастворимые компоненты удаляют центрифугированием или фильтрованием. [17]
Через отмытый водой анионит пропускают буферный раствор с рН 5 8 - 6 0 до тех пор, пока значение его рН на выходе из колонки будет таким же как и исходного буферного раствора. Для контроля рН нужно сравнить окраску исходного буферного раствора в присутствии индикатора-ализарина с окраской буферного раствора, прошедшего через колонку, после добавления в него такого же количества ализарина. [18]
Через отмытый водой анионит пропускают буферный раствор с рН 5 8 - 6 0 до тех пор, пока рН буферного раствора, пропущенного через анионит, не будет отличаться от рН исходного буферного раствора. Для контроля рН нужно взять в качестве эталона исходный буферный раствор с индикатором ализарином и сравнить его окраску с окраской буферного раствора, прошедшего через колонку в присутствии такого же количества ализарина. [19]
Буферная емкость ограничивается исходными количествами слабой кислоты и сопряженного с ней основания, так как то или другое вещество расходуется в результате реакции при добавлении кислоты или основания. В предыдущей задаче ( пример 4 - 11) исходный буферный раствор содержал 10 ммоль уксусной кислоты, а добавленное сильное основание взаимодействовало с ней. Естественно, что добавление 10 ммоль сильного основания привело бы к нейтрализации всей уксусной кислоты и буферное действие раствора исчезло бы вообще. Расчеты, подобные тем, что были проведены в примерах 4 - 10 и 4 - 11, показывают, что изменение рИ нарастает с все большей и большей скоростью по мере достижения буферной емкости. [20]
Рассмотрим две полоски бумаги / и / / ( фиг. Считается, что из зоны пятна вытесняется равный объем исходного буферного раствора, который равномерно распределяется по полоске бумаги в результате капиллярного насасывания. [21]
Если исходная концентрация высока, то зоны имеют тенденцию становиться более компактными. Как отмечает Эдвард, экспериментальным путем установлено, что если ионная сила на пятне значительно выше, чем в исходном буферном растворе, то образуется удлиненная зона с хвостом или в крайнем случае пятно совсем не перемещается. Диффузия иона пропорциональна квадрату концентрации, и если) А В, то на расплывание пятна, обусловленное диффузией, прохождение тока не влияет. Однако если ион, находящийся позади движущейся границы, имеет меньшую подвижность, чем ион, идущий впереди нее, то в процессе прохождения тока граница становится более резкой. Напротив, растекание зоны ускоряется, когда ион, находящийся позади границы, имеет более высокую подвижность по сравнению с ионом, находящимся впереди границы. [22]
Обработку исходным буферным раствором осуществляют до тех пор, пока не произойдет выравнивания рН элюата на выходе из колонки ( или жидкости, в которой суспендируют ионит) с рН исходного буферного раствора. Для его ускорения ионит можно сначала обработать раствором того же состава, что и исходный, но с большей концентрацией, а после достижения нужного значения рН уравновешивание продолжают исходным раствором. Другой способ уравновешивания заключается в том, что ионит суспендируют в исходном буферном растворе до получения достаточно жидкой суспгнзии. Добавлением раствора, содержащего соответственно кислый или основной компонент исходного буфера, доводят рН ( на рН - метре) до нужного значения. Затем сорбент уравновешивают исходным буферным раствором. Во всех случаях конечное состояние равновесия ( величину рН) необходимо контролировать. [23]
Для удаления солей ее диализируют против исходного буферного раствора. В отдиализированном растворе определяют содержание белка и наносят на колонку 50 - 100 мг белка в объеме 1 - 3 мл. [24]
Раствор белка, наносимый на колонку, должен иметь тот же состав и те же значения рН и ионной силы, что и исходный буферный раствор, которым уравновешен ионообменник. Образец переводят в исходный буферный раствор, подвергая его предварительно диализу или гель-хроматографии. Если объем пробы, предназначенный для ионообменной хроматографии, невелик, образец можно развести исходным буферным раствором. Нерастворимые компоненты удаляют центрифугированием или фильтрованием. [25]
Степень прочности сорбции и десорбции на смоле разных аминокислот, определяемая главным образом величинами зарядов молекул, различна. Наиболее прочно на смоле сорбируются диаминокислоты и наименее прочно - дикарбоновые аминокислоты. Разделение аминокислот при ионообменной хроматографии происходит при десорбции их со смолы элюирующими буферными растворами, отличающимися от исходного буферного раствора большими величинами рН и ( или) ионной силы. [26]
При непрерывном градиенте2 элюции изменение ионной силы и ( или) рН элюирующего раствора происходит постепенно, по линейной или нелинейной зависимости от объема протекающей жидкости. Линейное изменение ионной силы или рН элюирующего раствора происходит тогда, когда эти параметры изменяются пропорционально объему протекающей жидкости. В одном сосуде ( /) находится буферный раствор со значением ионной силы ( или рН), которое должно быть достигнуто к концу опыта, в другом смесителе ( 2), из которого раствор поступает непосредственно в колонку, вначале находится равный объем исходного буферного раствора. Часто применяют выпуклый или вогнутый градиенты, при которых ионная сила раствора увеличивается или уменьшается соответственно по экспоненциальной зависимости. Форму этих градиентов легко получить с помощью простого устройства, изображенного на рис. 14 5, В. [27]
Гомогенат свежесорванных листьев картофеля ( 25 г в 70 мл 0 5 М раствора ацетата натрия, содержащего 0 004 М хлорид магния) наносят на колонку и выдерживают в течение 30 мин для образования слоя хлоропластов. Затем слой хлоропластов перемешивают с песком так, чтобы скорость элюирования составляла 2 мл / мин. Первые порции элюата, имеющего коричневую окраску, анализируют колориметрически. Далее промывают колонку 250 мл исходного буферного раствора и 150 мл модифицированного буфера, отличающегося от исходного отсутствием полиэтиленгликоля или хлорида натрия. К элюату добавляют полизтиленгликоль и хлорид натрия до нужной концентрации и обе порции фильтруют через вторую колонку, аналогичную первой. При этом вирус вновь сорбируется на целлюлозе. [28]
Обработку исходным буферным раствором осуществляют до тех пор, пока не произойдет выравнивания рН элюата на выходе из колонки ( или жидкости, в которой суспендируют ионит) с рН исходного буферного раствора. Для его ускорения ионит можно сначала обработать раствором того же состава, что и исходный, но с большей концентрацией, а после достижения нужного значения рН уравновешивание продолжают исходным раствором. Другой способ уравновешивания заключается в том, что ионит суспендируют в исходном буферном растворе до получения достаточно жидкой суспгнзии. Добавлением раствора, содержащего соответственно кислый или основной компонент исходного буфера, доводят рН ( на рН - метре) до нужного значения. Затем сорбент уравновешивают исходным буферным раствором. Во всех случаях конечное состояние равновесия ( величину рН) необходимо контролировать. [29]
Обработку исходным буферным раствором осуществляют до тех пор, пока не произойдет выравнивания рН элюата на выходе из колонки ( или жидкости, в которой суспендируют ионит) с рН исходного буферного раствора. Для его ускорения ионит можно сначала обработать раствором того же состава, что и исходный, но с большей концентрацией, а после достижения нужного значения рН уравновешивание продолжают исходным раствором. Другой способ уравновешивания заключается в том, что ионит суспендируют в исходном буферном растворе до получения достаточно жидкой суспгнзии. Добавлением раствора, содержащего соответственно кислый или основной компонент исходного буфера, доводят рН ( на рН - метре) до нужного значения. Затем сорбент уравновешивают исходным буферным раствором. Во всех случаях конечное состояние равновесия ( величину рН) необходимо контролировать. [30]