Cтраница 2
В настоящее время наиболее ценным общим методом разделения стереоизомеров аминокислот считается метод ферментативного гидролиза ацилированных аминокислот. Общий ферментативный метод разделения рацемических аминокислот, разработанный Гринстайном и др. [534-536, 585], основан на наблюдении, что почечная ацилаза I и карбоксипеп-тидаза, реагируя с рацематами N-ацилпроизводных аминокислот, действуют только на L-изомер. Реакция приходит к концу после гидролиза 50 % рацемического продукта. Для разделения образующихся в результате реакции свободной L-аминокислоты и ацил - В-аминокислоты требуется лишь одна операция, так как свободная L-аминокислота нерастворима в неводных растворителях, в которых ацил - В-аминокислота растворяется. Для выделения некоторых аминокислот ( пролин, грег-лейцин, а. Как правило, используют ацетил - и хлорацетилпроизвод-ные аминокислот; гидролиз ацил - В-аминокислот при кипячении с кислотой не приводит к рацемизации. Представляет интерес тот факт, что ацилпроизводные L-аспарагиновой кислоты гидро-лизуются специфической ацилазой II, источником которой также служит ткань почек. [16]
Так, например, на основе краун-эфира с хиральными звеньями 2 2 -дигидроксиби-нафтила - 1 Г, создана подвижная фаза для хроматографии. Подобные краун-эфиры проявляют свойства энантиоселективных комплексообразо-вателей, с их помощью расщепляют рацематы аминокислот и аминов. [17]
Так как в пищевой промышленности и медицине применяют только L-изомеры аминокислот, рацемические смеси необходимо разделять на отдельные энантиомеры. Для этой цели используют различные хроматографиче-ские методы, в том числе и основанные на ионном обмене. Химические методы разделения, связанные с взаимодействием рацематов с определенными асимметрическими соединениями, достаточно сложны и не находят применения в промышленных условиях. Гораздо более эффективным является ферментативный метод разделения рацематов аминокислот, впервые разработанный и использованный японскими исследователями. В основу метода положена способность фермента ацилазы L-аминокислот специфически гид-ролизовать только ацилированные L-аминокислоты без воздействия на D-сте-реоизомеры. Ацилированные аминокислоты, полученные методом химического синтеза, подвергаются воздействию иммобилизованного фермента ацилазы, причем после полного ферментативного гидролиза образуется смесь ацилированной D-аминокислоты и свободного L-стереоизомера, легко разделяющиеся простой кристаллизацией или посредством ионообменной хроматографии. [18]
Биохимический метод особенно успешно используется в ряде вариантов для получения оптически активных аминокислот. Так, в процессе брожения дрожжи перерабатывают преимущественно L-формы аминокислот, а D-антиподы накапливаются и могут быть выделены. Таким же путем получают оптически активные D-аминокислоты из рацемических под действием растущих культур Penicillum glaucum, Aspergillus niger. Фермент липаза, выделенный из свиной печени, проявляет стереоспецифичность при гидролизе эфиров миндальной кислоты и родственных соединений. Так же действует фосфа-таза на фосфорнокислые эфиры терпеновых спиртов. Многочисленные ферментативные расщепления рацематов аминокислот были осуществлены под действием фермента папаина. [19]