Cтраница 1
Фенольный реактив Фолина-Чиокальтеудает синее окрашивание с щелочными растворами белков. Интенсивность окрашивания в основном зависит от содержания в исследуемом белке тирозина и триптофана. [1]
Чувствительный метод, в основе которого лежит колориметрическая реакция с фенольным реактивом Фолина - Чокальтеу [1 ], очень широко используется для определения отдельных белков, а также для контрольного анализа вытекающих из колонок элюа-тов, которые содержат много различных белков. [2]
После перемешивания в течение 10 - 20 с приливают 0 50 мл боратного буфера и тотчас же вносят 0 30 мл фенольного реактива, перемешивают 10 - 20 с и оставляют на 10 - 20 мин, после чего измеряют оптическую плотность при Я 454 нм. [3]
Готовят три пробирки, в каждую наливают по 5 мл раствора гидроксида натрия, 2 5 мл соответствующего фильтрата и 0 5 мл фенольного реактива. Содержимое пробирок быстро перемешивают, появляется синее окрашивание. [4]
Для проявления окраски поглотительный раствор переносят в пробирку, добавляют 2 капли раствора гипохлорита натрия, выдерживают 5 мин, нагревают до кипения для удаления избытка хлора, добавляют 5 мл фенольного реактива и еще раз выдерживают в течение 15 мин. Смесь переводят в трубку Несслера и сравнивают ее окраску со стандартными окрасками. [5]
Реактивы: казеин, 1 % - ный раствор; фосфатный буфер, 0 1 % - ный раствор ( Рн 8 0); ТХУ, 10 % - ный раствор; фенольный реактив; NaOH, 0 5 моль / л раствор. [6]
Реактивы: казеин, 1 % - ный раствор; фосфатный буфер, 0 1 моль / л раствор ( рН 8 0); ТХУ, 5 % - ный раствор; трипсин, 5 - 10 4 % - ный раствор в 0 005 моль / л НС1; гидроксид натрия, 0 5 моль / л раствор; фенольный реактив. [7]
Реактивы: казеин, 1 % - ный раствор; фосфатный буфер, / i5 моль / л раствор ( рН 5 4 - 8); ТХУ, 5 % - ный раствор; трипсин, 5 - 10 - 4 % - ный раствор в 0 005 мольдл НС1; гидроксид натрия, 0 5 моль / л раствор; фенольный реактив. [8]
Реактивы: казеин, 1 % - ный раствор; фосфатный буфер ( рН 8 0), 0 1 моль / л раствор; ТХУ, 5 % - ный раствор; трипсин, 5 - 10 - % - ный раствор в 0 005 моль / л растворе НС1; гидроксид натрия, 0 5 моль / л раствор; фенольный реактив. [9]
После этого прибавляют 2 мл фенольного реактива, разбавляют раствор до 25 мл и выдерживают 20 мин. Оптическую плотность полученного раствора измеряют в кювете с толщиной слоя 4 см при 620 нм. [10]
Определение протеолитической активности трипсина основано на количественном определении тирозина в продуктах расщепления казеина. В качестве реагента на тирозин используется фенольный реактив, дающий с тирозином синее окрашивание, интенсивность которого определяется колориметрически. [11]
Скорость реакции определяют по количеству образовавшегося тирозина, которое устанавливают колориметрической реакцией с фенольным реактивом Фолина. Интенсивность окраски получаемого комплексного соединения определяют на фотоэлектроколориметре. С помощью калибровочной кривой по полученным оптическим плотностям определяют количество образовавшегося тирозина и, подставляя эту величину в расчетную формулу, получают протеолитическую активность. [12]
В фильтратах определяют концентрацию образовавшегося тирозина. Для этого отбирают из каждой пробы по 2 5 мл фильтрата в отдельные пробирки и добавляют по 0 5 мл фенольного реактива. Концентрацию тирозина ( мкмоль / мл) находят по калибровочному графику. [13]
В две пробирки наливают по 5 мл 0 5 моль / л раствора гидроксида натрия, затем в одну из них наливают 2 5 мл полученного фильтрата контрольной пробы, в-другую - 2 5 мл фильтрата опытной пробы, в обе пробирки добавляют 0 5 мл фенольного реактива. Смесь тщательно перемешивают, появляется синее окрашивание. Находят разность между оптической плотностью опытной и контрольной проб. Затем по калибровочному графику определяют прирост тирозина в растворе в результате ферментативного гидролиза казеина. [14]
В этом объеме должно быть не более 6 мкг ионов аммония. Если раствор более концентрированный, отбирают меньший объем и разбавляют до 5 мл безаммиачной водой. Отобранную порцию пере носят в пробирку, снабженную притертой пробкой, прибавляют 1 каплю раствора сульфата марганца, 1 мл фенольного реактива и перемешивают. Затем приливают 0 5 мл гипохлоритного реактива, закрывают пробкой и энергично взбалтывают 2 мин. Дают постоять 4 ч для развития окраски и измеряют оптическую плотность по отношению к холостому раствору в кювете с толщиной слоя 1 см при К 625 нм. [15]