Полимеразная цепная реакция
Cтраница 1
Полимеразная цепная реакция, проводимая с помощью специфических олигонуклеотидных праймеров и термостабильной ДНК полимеразы позволяет избирательно амплифицировать определенные участки ген % ма чуть ли не в миллиард раз. Сфера применения метода поли-меразной цепной реакции очень широка. После такой избирательной амплификации появляется возможность проводить дальнейшие анализы с этим фрагментом ДНК, не прибегая к дорогостоящему и трудоемкому методу молекулярного клонирования. Помимо исключительно научного применения для наработки определенных участков генома для их дальнейшего изучения этот метод используется в медицинских исследованиях при диагностике опасных инфекций, наследственной патологии, предрасположенности к отдельным заболеваниям, при выявлении точечных мутаций, а также при генетическом картировании, генетическом полиморфизме, клеточном я гуморальном ответе на заболевания и др. Кроме этого, использование термостабильной ДНК полимеразы для определения нуклеотидных последовательностей фрагментов ДНК ферментативным методом по Сэнгеру позволяет проводить секвени-рующие реакции при повышенной температуре, что снимает влияние вторичной структуры и дает возможность секвенирования GC-богатых участков. Используя специфические праймеры, возможно секвениро-вать отдельные участки ДНК, минуя этап клонирования. [1]
Метод основан на полимеразной цепной реакции ( ПЦР) с соответствующими праймерами. [2]
Метод основан на асимметричной мультиплексной полимеразной цепной реакции ( амПЦР) с последующей гибридизацией продуктов этой амПЦР на биологическом микрочипе. [3]
Это явление известно как полимеразная цепная реакция. Права и на энзим, и на полимеразную цепную реакцию принадлежали изначально корпорации Cetus. Фармацевтическая промышленность изобилует такими примерами, чего не скажешь, к сожалению, о других отраслях. Европейская комиссия, чей штаб располагается в Брюсселе, установила, что 30 % исследований и разработок, предпринимаемых в Европе, дублируются. [4]
Следует отметить, что для проведения полимеразной цепной реакции вполне подходят неизмененные формы термостабильных ДНК полимераз. Использование же этих ферментов для определения нуклео-тидных последовательностей ДНК требует некоторой их модификации. Кроме самой полимеразной активности ДНК полимеразы, как правило, содержат еще и 5 - 3 -, и 3 - 5 -экзонуклеазные активности, нежелательные для секвенирования. Так, белковой инженерией был удален один домен ДНК полимеразы T. Однако, такая ЛГд ДНК полимераза, к сожалению, сохранила присущую ей строгую избирательность по отношению к типу включаемых ею в новую цепь ДНК нуклеотидтрифосфатов, и в связи с этим требовались дополнительные исследования, направленные на выяснение особенностей работы данных ферментов. [5]
Необходимо подчеркнуть, что обязательным условием проведения полимеразной цепной реакции является знание нуклеотид-ной последовательности того или иного объекта исследования ( вирус, бактерия и др.) - В настоящее время в банках данных имеются практически полные сведения о геноме различных патогенных микробов. [6]
ДНК in vitro ( в пробирке), осуществляемая с помощью полимеразной цепной реакции, широко применяется в диагностике наследственных болезней, выявлении ДНК патогенных организмов в клинич. [7]
ИБС на ЭКГ и в отобранные среди жителей города Уфы. Анализ полиморфизма ДНК проводили методом полимеразной цепной реакции ( ПЦР) на автоматическом термоциклере Биотерм с использованием Taq-полимеразы ( Бион, Россия) и праймеров, описанных Rigat В. [8]
Это явление известно как полимеразная цепная реакция. Права и на энзим, и на полимеразную цепную реакцию принадлежали изначально корпорации Cetus. Фармацевтическая промышленность изобилует такими примерами, чего не скажешь, к сожалению, о других отраслях. Европейская комиссия, чей штаб располагается в Брюсселе, установила, что 30 % исследований и разработок, предпринимаемых в Европе, дублируются. [9]
В последнее время, кроме генов рРНК коллектив лаборатории исследует гены белков холо-дового шока растений, генов лектинов бобовых растений с целью создания трансгенных растений с различными конструкциями маркерных генов, таких как глкжуронидаза, люцифераза и зеленый флуоресцентный белок под контролем промоторных областей исследуемых генов или их отдельных фрагментов. Для этих исследований понадобился уже метод амплификации ДНК с помощью полимеразной цепной реакции, освоенный сотрудниками в 1992 году. [10]
При его последующем разрезании образуется продукт мол. ДНК амплифицировали методом полимеразной цепной реакции ( ПЦР), а затем встраивали в выделенный из В. [12]
Обратная транскрипция-полимеразная цепная реакция ( Reverse transcription-polymerase chain reaction) Способ получения в большом количестве кДНК, состоящий из двух этапов. Вначале in vitro синтезируют кДНК, используя обратную транскриптазу, мРНК в качестве матрицы и oligo ( dT) в качестве праймера. Затем кДНК амплифицируют с помощью полимеразной цепной реакции ( ПЦР), используя два праймера: один комплементарен участку первой цепи кДНК, а второй - другой цепи, комплементарной первой. [13]
В заключении хотим еще раз подчеркнуть, что кратко рассмотренные выше исследования, посвященные организации и функционированию как генов рибосомных РНК пшениц и их диких сородичей, так и гена термостабильной ДНК полимеразы из экстремально-термофильной эубактерии T. Так, первая работа носит фундаментальный характер, и полученные в ходе ее выполнения сведения могут быть применены на практике в некотором отдаленном будущем. Хотя молекулярно-биологическая наука знает немало примеров, когда, казалось бы, исключительно фундаментальная работа очень быстро превращалась в мощный инструмент или дальнейшего познания, или использования ее в медицинских диагностических целях, как, например, уже многократно упоминавшаяся в ходе этого изложения полимеразная цепная реакция. Вторая работа, кроме фундаментального аспекта, уже имеет прямой выход в практику благодаря продукции термостабильного фермента Tfl ДНК полимеразы в бактериях кишечной палочки E. [14]
Разработал метод полимеразной цепной реакции ( получение неогранич. ДНК с помощью фермента ДНК-полимеразы), широко применяемый в мол. Получают плавлением в электропечах силикатов алюминия. [15]
Страницы: 1 2