Cтраница 1
Действие рибонуклеазы направлено в основном на разрыв связи, соединяющей фосфатный остаток при С-3 в пиримидиннуклео-тиде с С-5 следующего нуклеотида. Поэтому рибонуклеазу можно рассматривать как высокоспецифическую фосфодиэстеразу, гидро-лизующую только вторичные фосфорные группы пиримидин-нуклеозид - З - фосфатов. В соответствии с этим фермент может также гидролизовать циклические 2 3 -вторичные фосфаты пиримиди-нуклеозидов. [1]
РНК под действием рибонуклеазы протекает в две стадии. [2]
Ее инфекционность нарушается под действием рибонуклеазы, но сохраняется при обработке ВТМ антисывороткой. В то же время ВТМ инактивируется антисывороткой, но не рибонуклеазой. Инфекционность такой изолированной РНК составляет всего 0 3 % инфекционности эквивалентного количества РНК в неповрежденном вирусе. [3]
Подобная ситуация, по-видимому, реализуется в механизме действия рибонуклеазы. На примере синтетических аналогов переходного состояния субстратов было предположено [307], что в гидролизе рибозилфосфатных эфиров, катализированном рибонук-леазой, участвуют соединения типа переходного состояния субстрата, в которых фосфатная группа напоминает пентаковалентную тригональную бипирамиду. Присоединение и отщепление групп происходит вдоль оси симметрии. [4]
Миграции моноэтерифицированного фосфата в щелочных условиях не происходит. Специфическое действие рибонуклеазы, катализирующей образование пиримидиновых нук-леотидов из участков нуклеиновой кислоты с двумя или более соседними пиримидиновыми остатками и олигонуклеотидов из участков, где пуриновые нуклеотиды ограничены пиримидиновыми нуклео-тидами, было показано в результате изучения ферментативного гидролиза простых эфиров мононуклеотидов. В то время как алкило-вые ( бензиловые, метиловые и этиловые) эфиры пиримидиновых нуклеозид-3 - фосфатов легко превращаются в свободные З - нуклеотиды через нуклеозид-2 3 -циклофосфаты, аналогичные эфиры пиримидиновых нуклеозид-2 - фосфатов ( или пуриновых нуклеозид-2 - или нуклеозид-3 - фосфатов) совершенно не затрагиваются. [5]
Если РНК ткани предварительно расщеплена действием рибонуклеазы, то наличие поглощения в ультрафиолетовой области будет указывать на присутствие ДНК. [6]
Отсюда, по-видимому, можно заключить, что, например, 288-субъединица состоит из нескольких субъединиц, удерживаемых вместе водородными связями и другими слабыми взаимодействиями. Однако не исключено, что разрыв тяжа 28S происходит под действием рибонуклеазы во время выделения рибосом. Вполне возможно, что тяж 28S, так же как и 188-субъединица, существует in vivo в виде единственной цепи с ковалентными связями. [7]
Как известно, пиронин в смеси Паппен-гейма ( метиловый зеленый, пиронин) обладает избирательным сродством к РНК как ядра, так и протоплазмы. В методике Браше используется параллельно два среза: один из них подвергается действию рибонуклеазы, а затем оба окрашиваются метиловым зеленым - пиронином, или же 1 % водным раствором толуидинового синего. [8]
Этот компонент необычен тем, что к нему оказались не применимы общепринятые методы определения структуры. Нуклеотид, выделенный из дрожжевой рибонуклеиновой кислоты после обработки последней рибонуклеазой ( или в результате щелочного гидролиза в виде смеси 2 - и З - фосфатов), мог быть превращен в 2 3 -циклофосфат, который чувствителен к действию рибонуклеазы. Учитывая специфичность рибонуклеазы, было сделано предположение, что изучаемое соединение представляет собой производное пиримидина. Действительно, было найдено, что свободный нуклеозид имеет тот же элементарный состав, что и уридин. Однако ультрафиолетовые спектры поглощения его были ближе к спектрам 5-оксиметилурацила, а не 3-гликозилурацила. [9]
Если из тканей, которые активно синтезируют белок, например из поджелудочной железы, осторожно выделить рибосомы, они часто оказываются собранными в группы, состоящие из нескольких или из многих рибосом, число которых иногда доходит до 80 и даже больше. Такие скопления, названные полирибосомами, или полисомами, были изучены с помощью электронного микроскопа и химическим путем. Под действием рибонуклеазы полирибосомы разобщаются на индивидуальные рибосомы. Это указывает на то, что они удерживаются с помощью цепи РНК. Такая одновременная трансляция одной мРНК многими рибосомами значительно увеличивает эффективность использования матрицы. [10]
В данном разделе речь будет идти о таких ферментативных реакциях, в которых участвуют ферменты, не имеющие в активных центрах ионов металлов, и для которых достаточно точно установлен механизм нуклеофильного замещения у тетраэдрического атома фосфора в молекуле субстрата. В подобных случаях электрофильная атака в пуш-пульном механизме нуклеофильного замещения у фосфора обеспечивается за счет образования водородной связи между нуклеофильным центром реагирующей части молекулы фосфорсодержащего соединения и кислотной группой активного центра фермента. В качестве примера рассмотрим недавно опубликованные работы, посвященные механизму действия рибонуклеазы поджелудочной железы быка; ниже будут обсуждены некоторые вопросы, связанные с фосфорилированием и дефосфорилированием активных центров эстераз. [11]
Природа группировки с промежуточным значением р / С, равным 6, оставалась ( и остается до сих пор) неясной. Сама величина р / С 6 может быть отнесена к имидазолу, но вместе с тем она не зависит от температуры, что характерно для карбоксила. Авторы предполагают, что это имидазол с аномальной величиной АЯ ионизации, однако признают, что для окончательного доказательства этого предположения, нужны дополнительные данные. В этой работе были установлены детали механизма действия рибонуклеазы, в том числе обнаружены реакции изомеризации свободного фермента и комплекса фермент: - продукт. Тщательность кинетического анализа, проведенного в этой работе, позволяет отнестись с доверием к предложенному авторами химическому механизму действия рибонуклеазы, хотя не вполне ясно, действительно ли все обнаруженные реакции изомеризации входят в последовательность каталитических реакций. [12]
Следовательно, вирусная частица содержит 6000 нуклеотидов и не менее 25 000 аминокислотных остатков. Таким образом, отношение числа оснований к числу аминокислот равно приблизительно / 4 - Предположение об индивидуальном кодировании каждой аминокислоты вируса не совместимо со столь малым значением этой величины. Следовательно, белок должен состоять из идентичных белковых субъединиц. Так же как и вирус табачной мозаики, сферические вирусы устойчивы к действию рибонуклеазы. Следовательно, белковые субъединицы образуют оболочку, защищающую нуклеиновую кислоту вируса. Полагают, что эти субъединицы расположены не хаотически, а в каком-то определенном порядке. [13]
Природа группировки с промежуточным значением р / С, равным 6, оставалась ( и остается до сих пор) неясной. Сама величина р / С 6 может быть отнесена к имидазолу, но вместе с тем она не зависит от температуры, что характерно для карбоксила. Авторы предполагают, что это имидазол с аномальной величиной АЯ ионизации, однако признают, что для окончательного доказательства этого предположения, нужны дополнительные данные. В этой работе были установлены детали механизма действия рибонуклеазы, в том числе обнаружены реакции изомеризации свободного фермента и комплекса фермент: - продукт. Тщательность кинетического анализа, проведенного в этой работе, позволяет отнестись с доверием к предложенному авторами химическому механизму действия рибонуклеазы, хотя не вполне ясно, действительно ли все обнаруженные реакции изомеризации входят в последовательность каталитических реакций. [14]