Рибонуклеозидтрифосфаты

Cтраница 1

Рибонуклеозидтрифосфаты и дезоксирибонуклеозидтрифосфаты не являются субстратами фермента. Фермент не нуждается в матрице, однако для синтеза необходима затравочная цепь РНК ( НМФ) п со свободной З - гидроксильной группой, к которой присоединяются остатки моно-нуклеотидов. Образовавшаяся полимерная молекула РНК не имеет заданной специфической последовательности мононуклеотидов, но содержит 3 - 5 фосфодиэфирные связи, легко разрываемые рибонуклеазой. Относительно биологической роли этого фермента у бактерий предполагают, что он катализирует, скорее всего, обратную реакцию-расщепление мРНК с образованием нуклеозиддифосфатов. [1]

Предшественниками терминально присоединяемых нуклеотидов служат рибонуклеозидтрифосфаты, и их присоединение сопровождается обратимым отщеплением пирофосфата, который при этом процессе накапливается и ингибирует концевое присоединение нуклеотидов. [2]

Схема репликации / транскрипции генома реовируса. [3]

После заражения клетки наружная белковая оболочка вируса повреждается и в цитоплазме оказывается модифицированная вирусная частица. Имеющиеся в клетке рибонуклеозидтрифосфаты получают доступ к вирусной сердцевине, которая содержит 10 сегментов двухнитевой геномной РНК и несколько белков, в том числе РНК-полимеразу, способную использовать РНК-дуплекс в качестве матрицы. [4]

Важнейшим классом являются также ДНК-зависимые РНК-полимера зы. Эти ферменты катализируют синтез РНК, комплементарных ДНК-матрицам ( транскрипцию), используя в качестве субстратоа рибонуклеозидтрифосфаты. Сигнал инициации синтеза заключен в специальных регуляторы ых последовательностях ДНК, называемых промоторами. [5]

Для реакции необходимо присутствие ионов двухвалентного металла, обычно магния. При замене ионов магния ионами марганца специфичность реакции существенно изменяется: в присутствии Mg2 субстратами могут служить только дезоксирибонуклеозидтрифосфаты, в присутствии же Мп2 в реакцию вступают также рибонуклеозидтрифосфаты. Таким образом, в системе, содержащей Мп2, могут синтезироваться смешанные рибо-и дезоксирибонуклеиновые кислоты. [6]

Этот фермент обнаружен в составе онкогенных и неонкогенных вирусов, в спонтанной карциноме млекопитающих, в нормальных клетках мыши и человека, а также в клетках опухолей человека при отсутствии каких-либо РНК-содержащих вирусов. Обратная транскрип-таза, осуществляющая синтез ДНК, использует в качестве матрицы одноцепочечную РНК. Рибонуклеозидтрифосфаты в этой реакции не могут заменить дезоксирибо-нуклеозидтрифосфаты. Актиномицин D в этом случае не влияет на процесс синтеза ДНК. Непосредственным продуктом реакции является двухцепочечный гибрид РНК-ДНК, образующийся в результате синтеза комплементарной цепи ДНК на одноцепочечной РНК. [7]

Методы включения метки в З - концевые группы более разнообразны. Двух - и одноцепочечные ДНК могут быть помечены по З - концевому звену с использованием концевой нуклеотидилтрансферазы. В одном из вариантов этого метода к З - ОН-группе олигодезоксирибонуклеотида присоединяются a - 1JP ] - меченые рибонуклеозидтрифосфаты. После ферментативной реакции продукт подвергается щелочному гидролизу, в результате чего на З - конце образуется только одно рибонуклеотидное звено. [8]

Этот белок выполняет сложные функции - связывается с двунитевой ДИК, опознает на ней участок, с которого должен начаться процесс транскрипции, связывает субстраты - рибонуклеозидтрифосфаты, катализирует перенос нуклертидного остатка, отобранного с помощью ДНК-матрицы, на растущую полпрпбонуклеотидную цепь и еще несколько функций. [9]

Страницы: 1