Связывание - антитело
Cтраница 1
Связывание антител с антигеном облегчает поглощение антигена фагоцитами и часто активирует особую систему белков крови ( называемую комплементом), которая способствует разрушению антигена. Иммунный ответ клеточного типа включает образование специализированных клеток, реагирующих с чужеродным антигеном главным образом на поверхности собственных клеток организма; при этом последние уничтожаются ( если антиген-инфицирующий вирус) или же происходит разрушение антигена с помощью других клеток, таких как макрофаги. [1]
При связывании антител из кролика против бычьего ДНФ - - глобулина с Af-динитрофенилглициновым диазокетоном н последующем фотолизе продукты реакции ( 15), ( 15а) реагировали преимущественно с Н - цепями, однако точная локализация участков присоединения проведена не была. Арилнитрены образуются в результате фотолиза арилазидов. В соответствии с этим бычий у-гло-булин обрабатывали 4-азидо - 2-нитрофторбензолом, а затем получали и выделяли из кролика антитела на этот антиген. [2]
Там же была рассмотрена возможность связывания любых антител на матрице, несущей белок А из Staphylococcus aureus. [3]
Белки в монослоях часто сохраняют свои ферментативные свойства ( каталаза, трипсин) и способность к иммунным реакциям и связыванию антител. На этих свойствах основано исследование реакции специфических белков в ничтожно малых количествах. Интересный метод последовательного отложения многих белковых монослоев на твердых поверхностях был разработан Лэнгмюром и Шефером. [4]
Этот процесс представляет собой наиболее удивительный и яркий пример более общего явления - достижения биологической специфичности путем взаимодействия комплементарных структур, аналогичных тем, которые обусловливают связывание антител и антигенов ( разд. Объединение пуриновых и пиримидиновых оснований в пары путем образования двух или трех водородных связей происходит в соответствии с принципом комплементарности. Взаимное положение оснований в углеводнофосфатном скелете ДНК таково, что только пу-риновое основание одной цепи и пиримидиновое основание другой цепи могут образовать между собою водородную связь. В принципе возможны и неправильные пары - АС и GT. Однако, как видно из рис. 15.20, между А и С не могут образоваться водородные связи при заданном положении оснований в цепи ДНК. Между G и Т могла бы возникнуть одна водородная связь, но в действительности средние атомы водорода ( связанные с атомами азота колец как у G, так и у Т) создают пространственные затруднения, которые удерживают G и Т достаточно далеко друг от друга, препятствуя образованию такой связи. [5]
Данный метод предполагает, что за антиген-связывающую способность антитела отвечают только CDR-участки, а не каркасные области. Однако, если связывание гибридного антитела с антигеном происходит недостаточно эффективно, может возникнуть необходимость в замене некоторых аминокислот в каркасных областях с помощью олигонуклеотид-направленного мутагенеза. [7]
Площадь белков в монослоях заметно изменяется в зависимости от величины рН в результате изменения конфигурации и гидратации белковых молекул в поверхности. Белки в монослоях часто сохраняют свои ферментативные свойства ( каталаза, трипсин) и способность к иммунным реакциям и связыванию антител. На этих свойствах основано исследование реакции специфических белков в ничтожно малых количествах. Интересный метод последовательного отложения многих белковых монослоев на твердых поверхностях был разработан Лангмюром и Шефером. [8]
В последнее время большое внимание уделяется вопросу об использовании органов животных для трансплантации человеку. Гиперострое отторжение влечет за собой связывание антител организма-хозяина с углеводной антигенной детерминан-той на поверхности клеток пересаженного органа. Связавшиеся антитела вызывают острую воспалительную реакцию ( активацию каскада комплемента), происходит массовая гибель несущих антитела клеток и быстрая потеря пересаженного органа. [9]
Система комплемента действует сама по себе и в кооперации с антителами, защищая организм позвоночного от инфекции. Она состоит главным образом из неактивных белков крови, которые последовательно активируются в усилительном каскаде реакций. Этот процесс может протекать либо по классическому пути, который запускается связыванием антител IgG или IgM с антигеном, либо по альтернативному пути, который может запускаться непосредственно клеточными стенками внедрившихся микроорганизмов. [10]
Весьма эффективным методом уточнения топографии мембранных белков, прежде всего точной локализации внемембранных участков, является использование моноклоиальных антител. Для получения гибридом использовались фрагменты бактериородопсина, полученные путем его расщепления протеолити чески ми ферментами. Наиболее ценными в этом случае оказались синтетические фрагменты: коррелируя величину синтетического пептида и эффективность связывания соответствующего антитела, можно с высокой степенью достоверности зондировать выступающие ич мембраны полипептндные петли. [11]
 |
Характеристики иммуноферментных электродов. [12] |
В рассмотренных датчиках антигены образуют комплексы с антителами, иммобилизованными на электроде. Ключевым фактором при этом является иммобилизация одного из компонентов в полимерную пленку, гель или на поверхности электрода. Методика иммобилизации должна обеспечивать не только сохранение имму-нохимической активности белка, но и не вызывать химических или физических изменений поверхности электрода, которые могут привести к нежелательным эффектам. В этом плане большую привлекательность имеет ковалентная пришивка молекул белка с помощью сшивающих реагентов. Для получения устойчивого слоя антител необходимо, чтобы их число было минимальным, иначе может произойти связывание антител между собой. [13]
Этот показатель является очень важным как минимум по двум аспектам. Применительно к человеку, укушенному клещом, результат анализа показывает, достаточно ли устойчив человек к энцефалиту. А в случае использования крови здоровых доноров этот показатель свидетельствует о том, содержит ли кровь достаточное количество антивирусных антител, для того чтобы быть использованной для приготовления антивирусного иммуноглобулина. Последний может быть использован для введения человеку, укушенному клещом, для предотвращения развития инфекции. Известно, что поверхностный вирусный белок Е является основным антигеном ВКЭ. Этот белок можно достаточно прочно сорбировать на поверхности полистироль-ной пробирки. Если взять его в избытке, достаточном для количественного связывания антител к белку Е в образце, последние будут сорбированы практически полностью. [14]
Готовят растворы двух препаратов инсулина в концентрации 100 мкг / мл и раститровывают в микропланшете для ИФА в концентрациях от 10 мкг до 5 - 10 - 5 мкг в лунку. Инкубируют в течение ночи при 4 С, тщательно отмывают. Инкубируют в течение часа при 37 С, тщательно отмывают. Вносят конъюгат антимышиных антител с ферментной меткой и инкубируют в течение часа при 37 С. Тщательно отмывают и вносят соответствующий субстрат ( с. Через 30 мин определяют величину оптической плотности при соответствующей длине волны ( с. Строят графики зависимости величины оптической плотности от разведения антигена. Полученные графики должны свидетельствовать о том, что специфичность связывания антител к свиному инсулину значительно выше по сравнению со связыванием бычьего инсулина, хотя в последнем случае и наблюдается специфическое связывание. Такой результат свидетельствует о близком сходстве структур антигенных детерминант препаратов инсулина, однако исключает их тождество. Известно, что антигенные детерминанты этих двух белков различаются всего лишь одной аминокислотой. [15]
Страницы: 1