Конкурентное связывание
Cтраница 1
 |
Многоступенчатая система регулирования, осуществляемая глутаминсинте-тазой. ( ФФ - фосфорилиро-ванный фермент. По данным Воуег Р. В., The Enzyme, 3rd ed., Vol. 10, Academic Press, 1974, p. 791. [1] |
Конкурентное связывание Гли, Ала, СТФ и ТТФ. [2]
Принцип РИА основан на конкурентном связывании идентичных лигандов и антитела. [3]
Рассмотрим эти аспекты применения систем конкурентного связывания подробнее. [4]
По-видимому, при непродуктивном или конкурентном связывании используются некоторые из взаимодействий, возникающих в продуктивном фермент-субстратном комплексе. Так, из пяти связей, образуемых молекулой Gly-Tyr, только одна - между аминогруппой субстрата и остатком Glu-270 - считается непродуктивной. [5]
Несмотря на перспективность радиоиммунного метода и радиометода конкурентного связывания для идентификации лекарственных средств в биологических средах, они практически не разработаны для бенздиазепинов. Используя 0 1 мл плазмы в присутствии демоксепама, хлордиазепоксида и дезметил-хлордиазепоксида, можно избирательно определить 20 нг нордиа-зепама. [7]
Определение общего содержания Т4 в сыворотке крови, основанное на конкурентном связывании гормона белком, позволяет дать достоверную оценку функциональной активности щитовидной железы [ Ekins R. Например, при повышении содержания TBG в плазме крови эутиреоидных женщин, принимающих противозачаточные средства или в период беременности, отмечается ложный подъем Т4 в сыворотке крови [ Goolden A. W. et а. В этой связи предлагается использовать для оценки функциональной активности щитовидной железы определение концентрации Т4, позволяющее четко различать гипотиреоз и тиреотоксикоз. [8]
При добавлении органических субстратов происходит конкурентное ингибирование, которое является следствием конкурентного связывания в полости циклоамилозы. [9]
Радиоиммунный метод определения антигенов, например гормонов, основан на способности конкурентного связывания гормона, меченного радиоактивным изотопом, специфическими антителами. [10]
Аткинсон [18, 19] исследовал недавно вопрос о том, как влияет на кинетику процесса изменение концентрации субстрата в условиях, когда сумма концентраций субстрата и продукта реакции сохраняется на постоянном уровне и продукт является конкурентным ингибитором. Явление конкурентного связывания субстрата и продукта одноцентровой молекулой фермента хорошо известно. Новое здесь - условие сохранения постоянной общей концентрации конкурирующих реагентов. Иными словами, речь идет о реакции А - Х, начальная скорость которой исследуется в зависимости от А при А X const. Такого рода ситуация характерна для реакций с участием коферментов, при которых происходит взаимопревращение молекулярных форм, имеющее значительно большую скорость, чем реакции синтеза или распада основной структуры. [11]
Для использования моноклональных антител в изучении белковых антигенов важно знать, с одной и той же или разными антигенным и детерминантами ( эпитопами) антигена связываются полученные антитела. Эпитопную специфичность антител определяют методом их конкурентного связывания. Антитела одного клона конъюгируют с пероксидазой ( с. Берут 96-луночный микропланшет для ИФА и сорбируют в лунках антиген, как обычно ( с. [12]
В этой форме они связываются с анионной группой сульфированной смолы. Элюция аминокислоты достигается либо повышением рН и, таким образом, смещением равновесия ( 2) влево, либо увеличением ионной силы, что приводит к конкурентному связыванию со смолой аминокислот и катионов элюата. Аспарагиновая, глутаминовая и цистеиновая кислоты [ последняя образуется в результате окисления цист ( е) иновых остатков ( см. разд. Лизин и аргинин, напротив, элюируются с трудом в силу того, что каждый из них несет в боковой группе протонированную группу, - ежду этими крайними случаями располагаются остальные аминокислоты по мере того как увеличивается гидрофобное взаимодействие их боковых групп с ароматической структурой ионообменной смолы. Не удивительно, что ароматические аминокислоты обладают наибольшим гидрофобным связыванием и выходят лишь перед лизином и аргинином; С другой стороны, присутствие нейтральной полярной группы, такой как гидроксильная или амидная, уменьшает силу гидрофобного взаимодействия, так что серии, треонин, аспа - - рагин и глутамии элюируются раньше лейцина, изолейцина и ва-лина. [13]
Этот фермент необходим для реакций выделения изфосфолипидоварахидоновой кислоты, которая и служит источником синтеза простагландинов. Полагают, что кор-тикостероиды индуцируют синтез белков семейства липокортинов, которые, в присутствии ионов кальция имеют выраженную тенденцию к связыванию с анионными фосфолипидами. Благодаря такому конкурентному связыванию фосфолипаза А2 уже не может высвобождать арахидоновую кислоту в достаточном количестве. Кроме того, есть данные, что эти белки могут непосредственно связываться с фосфолипизой А2 и блокировать ее активность. [14]
Несмотря на большую вероятность этого предположения, очень мало известно о том, какими именно путями осуществляется само подавление синтеза белков. По мнению многих исследователей, биологическая активность тетрациклинов тесно связана с их способностью образовывать прочные хелаты с ионами магния, марганца, железа и ряда других двух - и трехвалентных металлов. Действительно, было установлено, что уже упоминавшееся угнетение тетрациклинами нитрат-редуктазы обусловлено их взаимодействием с ионами марганца, а подавление процессов фосфорилирования - связыванием ионов магния; прибавление больших количеств этих ионов приводит к ослаблению или полному прекращению действия тетрациклинов. Однако в ряде случаев наблюдаются не просто антагонистические, а очень сложные отношения между тетрациклинами и ионами двухвалентных металлов при их действии на ферменты; например, подавление хлортетрациклином липазы и а-ами-лазы животного происхождения даже стимулируется в присутствии ионов кальция. Эти данные показывают, что нельзя сводить весь механизм действия тетрациклинов к простому конкурентному связыванию ими ионов металлов, важных для жизнедеятельности микроорганизмов. [15]
Страницы: 1