Сухой сефадекс
Cтраница 1
Сухой сефадекс можно нагревать до 120 С; при дальнейшем повышении температуры происходит его карамелиза-ция. Сефадекс нельзя подвергать длительному воздействию-окислителей, поскольку они разрушают матрицу геля, в результате чего образуются свободные карбоксильные группы. [1]
Сухой сефадекс, добавленный к раствору который нужно сконцентрировать, благодаря высокой гидрофиль-ности интенсивно поглощает воду; при этом остающиеся в растворе высокомолекулярные соединения концентрируются. [2]
Соответствующее количество сухого сефадекса G-100 суспендируют в дистиллированной воде и после отстаивания мелкие плавающие в надосадочной жидкости частицы декантируют. Процедуру удаления мелких частиц повторяют несколько раз до тех пор, пока надосадочная жидкость не станет совершенно прозрачной. После этого сефадекс оставляют на сутки для набухания в дистиллированной воде. Набухший гель сефадекса уравновешивают 0 075 М фосфатным буферным раствором рН 7 0, содержащим 0 075 М NaCl, и загружают в колонку. [3]
При нагревании до 120 сухой сефадекс приобретает коричневую окраску. Сефадексы типа G набухают не только в воде, но также и в диметил-сульфоксиде, формамиде и гликоле, причем степень набухания в этих растворителях иная, чем в воде. Добавление к водным гелям спиртов вызывает их значительную усадку. [4]
 |
Хроматограмма нативного и. [5] |
Последний процесс осуществляется путем введения в раствор белка сухого сефадекса, в результате чего в процессе набухания сефадекса увеличивается концентрация белка, не способного проникать в сефадекс. В этом процессе концентрация низкомолекулярных электролитов мало меняется, так как их коэффициент распределения между гелевой фазой и внешним раствором близок к единице. [6]
К раствору, который должен быть сконцентрирован, добавляют сухой сефадекс G-25 ( крупнозернистый), суспензию тщательно перемешивают и через 10 мин. Каждый грамм сухого сефадекса G-25 поглощает примерно 2 5 г воды. После обработки сефадексом фильтрат или надосадочная жидкость становятся благодаря этому более концентрированными, чем исходный раствор, а рН и ионная сила их практически не меняются. [7]
Для обессоливания 100 мл белкового раствора необходимо примерно 25 г сухого сефадекса G-25. Объем раствора, из которого требуется удалить соли, должен быть не более одной пятой объема геля, заполняющего колонку. [8]
В колбу емкостью 150 мл со 100 мл дистиллированной воды вносят 30 мг сухого сефадекса и для ускорения набухания выдерживают 4 ч в теплой водяной бане. После охлаждения суспензию наливают в стеклянную колонку ( I) и слой промывают последовательно 100 мл воды, 200 мл 96 % - ного этанола, 200 мл элюента - смеси хлороформа, к-пропанола и воды. [9]
Сухой сефадекс суспендируют в 200-кратном объеме воды и оставляют стоять на 48 ч при комнатной температуре для полного набухания. [10]
Сухой сефадекс суспендируется в большом объеме дистиллированной воды. После осаждения основной массы сефадекса надосадочную жидкость с мельчайшими частицами геля декантируют. Эту-операцию отмывки повторяют несколько раз, пока падосадочная жидкость не будет содержать мельчайших частиц. Для отмывки и набухания сефадекса требуется 3 часа. [11]
К раствору, который должен быть сконцентрирован, добавляют сухой сефадекс G-25 ( крупнозернистый), суспензию тщательно перемешивают и через 10 мин. Каждый грамм сухого сефадекса G-25 поглощает примерно 2 5 г воды. После обработки сефадексом фильтрат или надосадочная жидкость становятся благодаря этому более концентрированными, чем исходный раствор, а рН и ионная сила их практически не меняются. [12]
Однократное проведение описанной процедуры позволяет сконцентрировать раствор примерно в 3 раза. Если необходимо дальнейшее концентрирование, то процесс повторяют со свежей порцией сухого сефадекса. [13]
Впервые сефадексы описаны Пор атом и Флодином ( J. Сефадексы используются для фракционирования высокомолекулярных веществ; очистки и обессоливания биологических субстратов; отделения избытка метчика от меченых высокомолекулярных веществ после введения радксивотопвой метки; определения молекулярного веса; концентрирования высокомолекулярных веществ в растворах ( в результате поглощения воды и низкомолекулярных соединений сухими сефадексами, предел эксклюзии которых менвше MB концентрируемого вещества; вследствие этого концентрация высокомолекулярных вешеств повышается без существенного изменения рН и конной силы раствора и, таким образом, без денатурирования лабильных высокомолекулярных веществ); в качестве носителя для распределительной хроматографии и электрофореза. [14]
 |
Время набухания сефадексов. [15] |
Страницы: 1 2