Cтраница 1
Неионные взаимодействия вещества с обмепником, как правило, ухудшают хроматографическое разрешение, размывают пики. [1]
Но иногда неионные взаимодействия могут и способствовать разделению близких по характеру электрического заряда веществ. Примером может служить описанный ниже метод разделения индивидуальных тРНК на бензоилированной целлюлозе. В этом случае матрицу целлюлозы химически модифицировали таким образом, чтобы сообщить ей определенную гидрофобпость. [2]
Тиолкарбаматы - вещества неионного характера, они адсорбируются на ионообменниках обоего типа и на гидрофильных коллоидах лишь в результате слабых неионных взаимодействий. [3]
Эфиры карбаминовых кислот в интервале рН 4 - 8 не ионизованы, так что в их адсорбции основную роль играют неионные взаимодействия. Растворимость большинства важнейших препаратов данного класса в воде мала. [4]
Простые нуклеотиды являются эфирами фосфорной кислоты и пуриновых или пиримидиновых нуклеозидов, и поэтому им присущи амфотерные свойства. Фосфатная группа нуклеотидов является своего рода анионной рукой молекулы, которая и обеспечивает разделение этих соединений на ионообменных колонках. Последовательность элюирования нуклеотидов определяется как неионными взаимодействиями этих молекул с сорбентом, так и величиной рН раствора. [5]
Абсолютный размер молекул ДНК генома накладывает определенные ограничения на хроматографические и электрофо-ретические методы, которые могут быть использованы для разделения этих соединений. Даже вирусные ДНК во много раз длиннее встречающихся в природе РНК. В силу очень высокого отрицательного заряда и значительных по величине неионных взаимодействий высокомолекулярных ДНК с сорбентом разделение этих соединений с помощью анионообменной хроматографии практически невозможно. [6]
Для очистки одного типа тРНК обычно необходимо несколько хроматографических стадий. После каждой стадии фракционирования тРНКх обнаруживают путем обработки определенных аликвотных порций элюата радиоактивно меченной аминокислотой X в присутствии соответствующей аминоацил-т РНК-синтетазы; фракции, в которых присутствует искомая тРНК, объединяют и наносят на другую колонку. Преимущества гидроксиапатита и сефарозы СС становятся очевидными в тех случаях, когда вы имеете дело со смесью тРНК, которую невозможно разделить с помощью других видов хроматографии. Разделение на этих сорбентах осуществляется исключительно за счет неионных взаимодействий, и поэтому порядок элюиро-вания тРНК кардинальным образом отличается от характерного для ионообменной хроматографии. [7]
После полного гидролиза белка производится количественное определение каждой из аминокислот, присутствующих в гидролизате. Для разделения аминокислот чаще всего применяется метод ионообменной хроматографии. В качестве ионообменника обычно используют сульфополистирольный катио-нит. Смесь аминокислот вносится в верхнюю часть колонки при рН 3; в этих условиях индивидуальные аминокислоты положительно заряжены. Аминокислоты в форме катионов сорбируются на сулъфополистирольной смоле ( содержащей группы - SOjNa), замещая часть ионов натрия, и удерживаются на материале колонки электростатическими силами. Очевидно, что прочность сорбции аминокислоты возрастает с увеличением ее основности. После внесения смеси начинается элгоция аминокислот при постепенном увеличении рН и ионной силы буферных растворов, пропускаемых через колонку. В этих условиях положительный заряд на аминокислотах постепенно нейтрализуется и ионные взаимодействия ослабляются. Первыми с колонки снимаются кислые аминокислоты ( глутаминовая и аспарагиновая кислота), затем нейтральные и, наконец, основные. С помощью этого метода можно разделять все аминокислоты, обычно встречающиеся в белках, поскольку прочность сорбции аминокислоты смолой зависит как от ионных, так и от неионных взаимодействий. Сульфополистирольный катион адсорбирует аминокислоты достаточно избирательно, так что все нейтральные аминокислоты, которые нельзя разделить с помощью ионного обмена, тем не менее элюируются с колонки в разных фракциях. Индивидуальные аминокислоты, элюируемые с колонки, собираются автоматическим коллектором фракций. Затем их количественно определяют путем измерения интенсивности окраски, возникающей при действии нингидрина. [8]