Cтраница 1
Обращенно-фазные системы, почти не применяемые в настоящее время. [1]
Весьма липофильные стероиды поддаются эффективному разделению в обращенно-фазных системах, например парафиновое масло или керосин в качестве неподвижной фазы, смеси спиртов с водой, ацетон или уксусная кислота в качестве подвижной фазы. [2]
При хроматографировании таких липофильных веществ, которые в обычных растворяющих системах перемещаются вместе с фронтом растворителя, целесообразно применять обращенно-фазные системы. [3]
Большинство низших алифатических спиртов представляет собой летучие соединения, которые нельзя хроматографировать непосредственно на бумаге. Высшие алифатические спирты нелетучи, но обычно настолько липофильны, что их можно хроматографировать только в обращенно-фазных системах. [4]
При разделениях на неполярных адсорбентах чаще всего применяют полярные подвижные фазы: смеси воды со спиртами или ацетонитрилом. В этом случае наиболее сильно удерживаются малополярные вещества, способные к сильному дисперсионному взаимодействию с адсорбентом и слабо взаимодействующие с подвижной фазой; уменьшение полярности последней сокращает время анализа. Наоборот, полярные вещества слабо удерживаются обращенно-фазной системой и часто могут не разделяться; в этом случае снижение полярности подвижной фазы увеличивает удерживание и может способствовать разделению полярных веществ. [5]
Для этого в темной комнате быстро погружают сухую хроматограмму в 0 5 % - ный раствор нингидрина в ацетоне, 120 мин сушат на воздухе при комнатной температуре в темноте, после чего выставляют на 15 мин на солнечный свет или очень сильный искусственный свет. Многие первичные амины, в которых аминогруппа связана со вторичным углеродным атомом, реагируют медленно или только после облучения, так что их можно отличить от аминов других типов. Высшие амины следует хроматографировать в виде свободных оснований, применяя обращенно-фазные системы. Пятна эфиров при этом окрашиваются в синий цвет. Гуанидины можно хроматографировать в гидрофильных системах, например смеси н-бутанол - пиридин - вода ( 3: : 2: 3), и обнаруживать реагентом Джаффе ( разд. Аминоспирты, гидразиды и семикарбазиды, а также производные мочевины хроматографи-руют в гидрофильных системах. Поскольку такие соединения хроматографируют редко, мы не будем касаться этого вопроса, а соответствующие данные читатель может найти в специальных монографиях по БХ. Недавно Тоул и др. [129] опубликовали статью, в которой описывается разделение 1 2-диоксимов и моноксимов на пропитанной формамидом бумаге с применением простых эфиров в качестве подвижных фаз. [6]
Вечеркова и др. ( см., например, [78, 134, 135]) исследовали БХ многочисленных лекарственных средств и их метаболитов. Среди многочисленных статей, посвященных хроматографии лекарственных средств, приведем в качестве примеров обзоры Цимбуры [27] и Блажека и Стей-скала [11], в которых рассматривается БХ фенотиазинов. Фе-нотиазины - сильные основания, в недиссоциированном виде они липофильны, поэтому для их хроматографирования пригодны обращенно-фазные системы. [7]
Широко применяют также бумагу, пропитанную буферным раствором. Меркаптопроизводные имидазо-лина, тиазолина, бензоимидазола и бензотиазола хроматографи-руют в насыщенном водой н-бутаноле и других полярных растворяющих системах. Диалкилполисульфиды и элементная сера настолько липофильны, что их следует хроматографировать в обращенно-фазных системах, а обнаруживать нитратом серебра или перманганатом калия. [8]
Это может значительно изменить разделительную систему. Часто такое происходит с обычными фазами в обра-щенно-фазной хроматографии. Для нескольких литров и меньшего количества любого растворителя удобно использовать комбинацию вакуума и ультразвукового озвучивания в течение короткого периода времени. Это приводит к быстрому удалению больших количеств растворенного газа в растворе. Для больших количеств может быть более удобно пропускать быстро растворитель через устойчивые к растворителю микропористые мембраны, тонкие фильтры или малые отверстия под давлением; быстрая декомпрессия растворителя на выходе из малых каналов обычно приводит к дегазации, достаточной для последующего использования подвижной фазы в препаративной ЖХ. Особой проблемой является дегазирование воды, которая легко растворяет газы. Ее следует тщательно дегазировать заранее, особенно при использовании в смеси с другими органическими растворителями в обращенно-фазных системах. Газы больше выделяются при смешивании воды со спиртом, чем с ацетонит-рилом, имеющим отрицательную теплоту растворения в воде, в результате чего смесь охлаждается. Подвижная фаза должна находиться при достаточно постоянной температуре. Это требование становится более критичным для распределительных ЖХ и ионообменных систем, а также при использовании чувствительных к изменению температуры детекторов. Следует помнить, что первоначальное смачивание в колонке сухого слоя, содержащего активные гидрофильные насадки ( например, оксид кремния, оксид алюминия, ионообменные материалы, ионообменные смолы), может привести к значительному выделению тепла, обусловленному адсорбцией следов воды неподвижной фазой. Это количество тепла достаточно для дегазирования, даже закипания некоторых растворителей, таких, как хлорометан. С помощью постоянно протекающей подвижной фазы теплота будет вскоре отведена, но потребуется достаточно большое время для того, чтобы привести систему в равновесие как по составу, так и по температуре. Следует также предусмотреть при необходимости отвод выделяющегося газа и воздуха, вытесняемого из системы, заполненной первоначально сухой насадкой. [9]