Cтраница 1
Гемолитическая система состоит из смешанных в равных объемах гемолитической сыворотки ( взятой в тройном титре) и 3 % - й взвеси эритроцитов барана. Для сенсибилизации эритроцитов гемолизинами смесь выдерживают в термостате при 37 С в течение 30 мин. [1]
Метод состоит в том, что на первом этапе сенсибилизируют гемолитическую систему и смешивают с расплавленным и охлажденным до 40 - 45 агаром. Смесь быстро разливают в чашки и остужают. На слой застывшего агара с гемосистемой на втором этапе наслаивают опытную ( инкубированную при 37 в течение 1 ч) смесь, состоящую из антигена, антител и комплемента. [2]
На фильтровальную бумагу, предварительно пропитанную барбитал-желатиновым солевым раствором, наносят АГ АТ ком-племент. Затем берут гемолитическую систему ( инкубированную при 37 в течение часа), орошают опытные участки фильтровальной бумаги и вновь помещают ее в термостат при 37 на 45 - 60 мин. После этого производят проявление, то есть с помощью физраствора проводят отмывание бумаги. При этом красный пигмент из гемолизированных участков удаляется физраствором, а негемолизированные участки оста-гются окрашенными. [3]
Добавляют по 1 капле гемолитической системы, инкубируют в течение 1 ч при 37 С, выдерживают 10 - 15 мин при комнатной температуре и учитывают результат. Контролем служит лунка с 3 каплями физиологического раствора и 1 каплей гемолитической системы. [4]
Рабочий титр комплемента при использовании сухого комплемента можно определять для всей серии один раз, но в последующем необходимо проверять его в соответствующем контроле при каждой постановке РСК. Затем добавляют по 1 капле гемолитической системы, инкубируют в течение 1 ч при 37 С и после выдерживания в течение 10 - 15 мин при комнатной температуре учитывают степень гемолиза. За рабочий титр комплемента принимают его разведение, вызвавшее умеренный гемолиз: розовое окрашивание жидкой среды при наличии небольшого осадка нелизированных эритроцитов. Работать с разведениями комплемента, вызывающими полный гемолиз ( лаковая кровь), нельзя, так как в данном случае будут получены заниженные результаты, поскольку химические аллергены связывают относительно небольшие количества комплемента. Обычно рабочий титр комплемента при использовании имеющегося в продаже сухого комплемента равен 1: 32, так как разведения 1: 4 - 1: 16 вызывают полный гемолиз, а разведение 1: 64 вообще не вызывает гемолиза. [5]
Постановка РСК в модификации Л. А. Дуевой: в 2 ряда лунок вносят по 1 капле двукратных разведений испытуемой сыворотки ( накануне или в день опыта инактивированной при 56 С в течение 30 мин); в первый ряд добавляют по 1 капле рабочего разведения аллергена, во второй ( контрольный) - по 1 капле физиологического раствора; затем в оба ряда вносят по 1 капле комплемента в рабочем титре. Смесь инкубируют при 37 С в течение 1 ч, затем добавляют во все лунки по 1 капле гемолитической системы, приготовленной ex tempore, повторно инкубируют в течение 1 ч при 37 С. [6]
Реакция связывания комплемента ( РСК) относится к сложным серологическим реакциям. Специфическое взаимодействие АГ и AT сопровождается адсорбцией ( связыванием) комплемента. Жангу предложили использовать в качестве индикатора гемолитическую систему ( эритроциты барана гемолитическая сыворотка), которая показывает, фиксирован ли комплемент комплексом АГ-АТ. Если AT не соответствует АГ, то комплекс не образуется и комплемент, оставаясь свободным, соединяется со второй системой и вызывает гемолиз ( см. цв. [7]
Добавляют по 1 капле гемолитической системы, инкубируют в течение 1 ч при 37 С, выдерживают 10 - 15 мин при комнатной температуре и учитывают результат. Контролем служит лунка с 3 каплями физиологического раствора и 1 каплей гемолитической системы. [8]
Предложен ряд модификаций РСК, отличающихся повышенной чувствительностью и меньшим объемом используемых ингредиентов. Так, например, при вирусологических исследованиях объем ингредиентов для РСК на холоде - 1 мл ( см. подразд. Для капельной РСК берут 1 каплю сыворотки 1 каплю антигена 1 каплю комплемента 2 капли гемолитической системы. [9]
В две пробирки разливают исследуемую сыворотку по 0 05 мл. Пробирки помещают в анаэростат, из которого удаляют воздух и вводят другую газовую смесь, создавая тем самым хорошие анаэробные условия. После этого производят учет результатов реакции в темном поле микроскопа. В опыте и контроле считают 25 трепонем: определяют сколько из них подвижных и сколько иммобилизованных и затем вычисляют процент иммобилизации. К опытным сывороткам, не давшим иммобилизации, добавляют гемолитическую систему для выявления свободного комплемента. Если наступает гемолиз, то результат считается правильным. К данной реакции рекомендуется ставить дополнительно серию контролен, исключающих возможность неспецифических реакций. [10]