Cтраница 1
Динитрофениламинокислоты ( ДНФ-аминокислоты) и фенилтиогидантоины ( ФТГ-аминокислоты) образуются при действии динитрофторбензола [151 - 154] или фенилгорчичного масла [155] на протеины или пептиды; продукты конденсации разделяют соответствующим методом. [1]
Динитрофениламинокислоты ( ДНФ-аминокислоты) ифенилтиогидантоины ( ФТГ-аминокислоты) образуются при действии динитрофторбензола [151 - 154] или фенилгорчичного масла [155] на протеины или пептиды; продукты конденсации разделяют соответствующим методом. [2]
Упомянутые выше методы получения динитрофениламинокислот ( ДНФ-аминокислот) иллюстрируются схемой реакций, приведенной ниже. [3]
Некоторые трудности при определении аминокислот, например неко-личественпое протекание нингидриновой реакции: и возможность взаимодействия аминокислот с бумагой ( Кофраыы) и друг с другом ( Бек и Эбри [2]), привели к тому, что некоторые авторы стали хроматографировать вместо аминокислот их производные, например медные комплексы. Особенно удобным является перевод аминокислот в динитрофениламинокислоты взаимодействием с 1-фтор - 2 4-динитробензолом, что было тщательно проверено на примере определения N-концевых аминокислот ( подробнее см. на стр. Лейцин и изолейцин остаются неразделенными. Несмотря па сложности, обусловленные рядом операций, предшествующих собственно хроматографированию, и некоторыми побочными реакциями, этот метод приобрел широкое распространение. Анализируемые образцы могут, очевидно, содержать белки и неорганические соли. [4]
Наилучший метод установления природы аминокислоты, которой принадлежит концевая аминогруппа пептидной цепи ( N-концевая кислота), состоит в действии на кислоту 2 4-динитрофторбензолом - соединением, высокореакционноспособным при нуклеофильном замещении с участием аминов, но не амидов ( см. гл. В результате этой реакции образуется М-24 - динитрофенильное производное пептида, которое после гидролиза по амидной связи дает N-24 - динитрофениламинокислоту. [5]
Наилучший метод установления природы аминокислоты, которой принадлежит концевая аминогруппа пептидной цепи ( N-концевая кислота), состоит в действии на кислоту 2 4-динитрофторбензолом - соединением, высокореакционноспособным при нуклеофильном замещении с участием аминов, но не амидов ( см. гл. В результате этой реакции образуется К-24 - динитрофенильное производное пептида, которое после гидролиза по амидной связи дает М-24 - динитрофениламинокислоту. [6]
С-конщевой, превращаются в соответствующие гидразиды. Удаление избытка гидразина и обработка остатка 2 4: динитрофторбен-золом позволяет отделить С-концевую кислоту в виде растворимой в основаниях М-24 - динитрофениламинокислоты. [7]
Разделение производных аминокислот очень важно при определении строения пептидов. Для этой цели используют реакции белков и пептидов с 2 4-динитрофторбензолом, 1-диметиламино-нафталин - 5-сульфонилхлоридом или фенилизоцианатом с последующим распадом до динитрофениламинокислот, 1-диметилами-нонафталинсульфониламинокислот ( ДАНС - или ДНС-аминокис-лоты) и фенилтиогидантоинов соответственно. Методика приготовления этих производных описана в литературе ( ДНФ [94-97], ДАНС [98-101], ФТГ [102-106]) и здесь не рассматривается. Росмус и Дейл [ 106а - 106в ] обобщили работы по методам идентификации N-концевых аминокислот в пептидах и белках. [8]
Установление природы С-концевой кислоты в пептидной цепи может представить большие трудности. Вероятно, наиболее широко применимым методом является нагревание пептида с безводным гидразином, при котором все аминокислоты цепи, за исключением G-концевой, превращаются в соответствующие гидразиды. Удаление избытка гидразина и обработка остатка 2 4-динитрофторбензолом позволяет отделить С-концевую кислоту в виде растворимой в основаниях N-24 - динитрофениламинокислоты. [9]
Среди абсолютных методов удобным и в ряде случаев несложным является метод концевою анализа. Как в белках, так и в нуклеиновых кислотах на концах имеются группы, существенно отличающиеся по своим свойствам от соответствующих групп внутренних остатков. Зная одновременную массу исследуемого образца, нетрудно отсюда найти молекулярную массу. В белках для концевого анализа используют динитрофенильную группу, которую вводят по уникальной концевой а-аминогруппе обработкой динитрофторбензо-лом. Введенная метка устойчива в условиях полного расщепления белка до аминокислот. Лишенная положительно заряженной в кислой и нейтральной среде а-аминогруппы динитрофениламинокислота может быть легко отделена от остальных о-аминокислот, образовавшихся при гидролизе полипептидной цепи, а ее количество может быть измерено по характерному для динитрофенильных производных УФ-поглощению при 360 нм. [10]