Cтраница 2
Обычно доля трансформированных клеток из всех клеток, обработанных соответствующей ДНК, действительно мала. Один из факторов, способствующих успеху, заключается в выборе более восприимчивого к трансформирующему агенту штамма, поскольку штаммы могут сильно различаться. Оптимальная концентрация составляет около 0 5 - 10 - 6 г / мл; оптимальным для трансформации временем является период непосредственно после-завершения цикла деления. Если пневмококки охлаждать до температуры, при которой рост останавливается, а затем вновь подогревать, они начинают делиться синхронно и случаев трансформации становится исключительно много. [16]
В процессе взаимодействия трипсина с ингибитором трипсина из бычьей поджелудочной железы Lys-15 молекулы ингибитора располагается в кармане специфичности трипсина, а атом углерода карбонильной группы этого остатка образует ковалент-ную связь с атомом кислорода бокового радикала Ser-195 фермента. Тем не менег карбонильный атом углерода Lys-15 по-прежнему остается связанным с амидным азотом А1а - 16 ингибитора. Образуется, по всей видимости, тетраэдрический продукт, распад которого до ацилфермента, содержащего хр2 - атом углерода, предотвращается за счет сохранения связи с атомом азота Ala-16. Реакция не идет в силу нескольких причин. Одна из них заключается в положении имидазольного цикла His-57, участвующего в системе переноса заряда активного центра сериновых протеиназ. В то-зилхимотрипсине и индолакролеилхимотрипсине N атом гистиди-на-57 направлен в сторону атома кислорода ацилирующих груп-п и связанной водородной связью молекулы воды, в то время как в тетраэдрическом комплексе трипсина с бычьим панкреатическим ингибитором трипсина этот атом азота направлен в сторону атома кислорода бокового радикала Ser-195. Кроме того, между поверхностями белков, контактирующими в тетраэдрическом комплексе, не остается места для молекулы воды. И, наконец, МН-группа Ala-16 ингибитора является донором водородной связи по отношению к карбонильному кислороду Gly-36 ингибитора. В случае трансформации тетраэдрического комплекса в ацилфермент эта связь должна разрушаться. [17]